4.蛋白质的化学.ppt

* 体内多数蛋白质的pI为5左右，在生理条件下（pH为7.4）多以负离子形式存在。 * 四、Pr的胶体性质 Pr为亲水胶体 具有布朗运动、光散射现象、不透过半透膜以及具吸附力等胶体性质 Pr亲水胶体的稳定因素： 1.Pr表面具有水化层 由其表面亲水的极性基团的水合作用，在Pr表面形成较厚的水化层，使Pr分子隔开，阻止其聚集而沉淀。 极性基团：－NH3＋、－COO-、－CO-NH、－OH、－SH等 2.Pr表面具同性电荷 同电相斥，使Pr颗粒不致聚集而沉淀。 Pr亲水胶体性质可作为分离纯化Pr方法的依据。 * * 五、Pr的沉淀反应 Pr的沉淀反应： Pr分子聚集而从溶液中析出的现象 1.中性盐沉淀反应 低浓度盐可使Pr溶解度增加－－盐溶作用 与Pr 表面吸附离子导致其带同种电荷排斥增强； 高浓度盐使Pr聚集沉淀－－盐析作用 与破坏水化层并中和电荷有关 常用的盐：硫酸铵，NaCl，Na2SO4等 可进行分级沉淀。沉淀之Pr不变性。 * 2.有机溶剂沉淀反应： 使Pr失去水化层而沉淀。温和条件Pr 不变性（低温） 3.加热沉淀 可使Pr变性，但是沉淀与否与溶液pH有关。pI时最易沉淀。偏酸或偏碱Pr变性并不沉淀。 4.重金属盐沉淀反应 碱性条件下，Pr带负电荷，与重金属离子结合成不溶性蛋白盐沉淀 重金属：Cu++、Hg2+、Pb2+、Ag+等 * 5.生物碱试剂沉淀反应 酸性条件下，Pr带正电荷，与生物碱试剂结合成不溶性的沉淀。 生物碱试剂： 苦味酸、磷钨酸、磷钼酸、鞣酸、三氯醋酸、磺基水杨酸等 蛋白质变性和沉淀是两个不同的概念。 蛋白质变性有时表现为沉淀，亦可表现为溶解状态；同样蛋白质沉淀可变性也可不变性。这取决于沉淀的方法和条件以及是否对蛋白质空间结构有无破坏而定。 * 六、颜色反应： * 蛋白质的呈色反应 （1）茚三酮反应：蛋白质经水解后产生的AA也可与茚三酮试剂作用生成蓝紫色化合物. （2）双缩脲反应：蛋白质在碱性条件下与稀硫酸铜反应，出现紫色或紫红色. （3）酚试剂反应：在碱性条件下，蛋白质分子中的Tyr,Trp可与酚试剂反应生成蓝色化合物.（酚试剂为磷钨酸—磷钼酸化合物） * 第六节 蛋白质的分离纯化 等电点沉淀:蛋白质在等电点时溶解度最小 盐析沉淀:一定浓度的中性盐可破坏蛋白质胶体的稳定因素而使蛋白质盐析沉淀。盐析沉淀的蛋白质一般保持着天然构象而不变性。有时不同盐浓度可有效的使蛋白质分级沉淀。 低温有机溶剂沉淀法:有机溶剂的介电常数较水低，因此在一定量有机溶剂中，蛋白质分子间极性基团的静电引力增加，而水化作用降低，促使蛋白质聚集沉淀。 温度对蛋白质荣季度的影响 * * 3.β－折叠结构（ β－pleated sheet structure） 又称β－片层结构 结构特征： （1）肽链的伸展使肽键平面之间折叠成锯齿状； （2) 肽链平行排列，相邻肽链之间的肽键交替形成氢键 为维持构象的主要次级键 （3)肽链平行走向有顺式和反式两种，N端同侧为顺式， 不在同侧为反式； （4)AA残基的R基团在片层的上下 * 4.β－折角（转角）（ β-bend） 伸展的肽链形成180°回折－U型转折结构 由连续的四个AA残基构成， 第一个AA残基的＝O与 第四个AA残基的N-H形成氢键。这一段结构往往第二个AA残基为Pro（亚氨酸）。 5. 无规线团（卷曲）random coil 除上述构象外的不规则构象（自由折叠或无规线团） 一种蛋白质的二级结构并非单纯的α －螺旋或β－折叠，由不同类型的组合。 * （三）超二级结构：模块或模序(motif) 在多肽链内顺序上相邻的二级结构常常在空间折叠中靠近，彼此相互作用，形成有规则的二级结构聚集体。如：αα、βββ、βαβ等。 * （四）结构域domain 是位于超二级结构与三级结构间的一个层次。 在较大的蛋白质分子中，多肽链上相邻的超二级结构紧密联系，进一步折叠形成一个或多个相对独立的致密三维实体。 每个结构域由100～200AA残基组成，各有独特的空间结构，并担负不同的生物学功能。 较大的蛋白质有多个结构域，可以是相似的，也可能是完全不同的。 IgG由12个结构域组成 * *