皮肤科免疫荧光技术_培训课件.pptVIP

皮肤科免疫荧光技术 河北医科大学第二医院皮肤科 郭兵申 免疫荧光技术概述 原理 将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 分类 直接法：将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应。 间接法：将荧光素标记的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反应，形成抗原-抗体-抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反应。 免疫荧光原理示意图 临床常用荧光素染料 ⑴异硫氰酸荧光素（FITC） λ吸=490--495nm 、λ发=520--530nm、黄绿色荧光 ⑵四乙基罗丹明（RIB200） λ吸=570nm、 λ发=595～600nm、呈橘红色荧光 ⑶四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC） λ吸=550nm、 λ发=620nm、呈橙红色荧光 皮肤直接免疫荧光检测 适应症： 非感染性大疱性皮肤病 天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA大疱性皮病、获得性大疱性表皮松解等 结绨组织病：如红斑狼疮等 各种血管炎 皮肤肿瘤 某些感染性皮肤病 皮肤间接免疫荧光检测 ?适应症： ?血清中各种抗微生物抗体测定 如：梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等 ?血清中各种自身抗体的测定 系统性疾病：如红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病等 大疱性皮肤病：如天疱疮抗体等 糖尿病：如抗胰岛细胞抗体等 操作方法及流程 放入生理盐水送检 手术取材 ?外观正常未受累皮肤 ?直径1-2mm带疱皮损 （米粒大小水疱） ?直接荧光患者标本采集 操作方法及流程 冰冻切片、染色、镜检 组织修材，成适合冰冻包埋块的大小 冰冻切片 抗原与荧光抗体结合 荧光显微镜下镜检及成像，打印报告 操作方法及流程 间接免疫荧光染色步骤 操作方法及流程 实验室操作图片 直接荧光组织修材 冰冻切片 实验室操作图片 荧光染色 水浴箱孵育 实验室操作图片 荧光显微镜镜检 免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本） IgG抗体 镜下描述： 镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状沉积，荧光阳性。 免疫荧光镜下天观（类天疱疮患者标本） C3补体 荧光镜下： 镜下可见荧光标记的C3补体于表皮基底膜带呈线状沉积，荧光阳性。 免疫荧光在大疱性皮肤病中的意义 大疱性皮肤病 沉积部位 荧光抗体 沉积形状 靶抗原 寻常型天疱疮 细胞间 IgG、C3（少数有IgM和IgA） 网状 Dsg3可有Dsg1 增殖型天疱疮 细胞间 同上 网状 Dsg3可有Dsg1 落叶型天疱疮 细胞间 IgG或IgG、C3 网状 Dsg1 副肿瘤性天疱疮 细胞间（少数细胞间和表皮下） IgG或IgG、C3 网状或线状 少数BP230 IgA天疱疮 细胞间 IgA（偶有C3、IgG和IgM） 网状 --- 疱疹样天疱疮 细胞间 IgG、C3 网状 --- 大疱性类天疱疮 基底膜带 IgG、C3或仅有C3（少数有IgM和IgA）盐裂后IgG在表皮侧 线状 BP180、BP230 瘢痕性类天疱疮 基底膜带 IgG、C3（25％可有IgM或IgA） 线状 --- 妊娠疱疹 基底膜带 C3（10％-20％可伴有IgG） 线状 可有BP180 疱疹样皮炎 90％真皮乳头，少数基底膜带 IgA、C3（偶伴有IgG和IgM） 乳头处颗粒状，少数线状 --- 线状IgA大疱性皮病 基底膜带 IgA也可伴有C3、IgG和IgM 线状 可有BP180 获得性大疱性表皮松解 基底膜带 IgG、C3（少数有IgM和IgA）盐裂后沉积于真皮侧 线状（比类天的荧光带要宽） --- 暂时性和持久性棘层松解性皮病 免疫荧光检测阴性