实验室的标操作规程(SOP)(PPT 13).ppt

实验室的标准操作规程（SOP） 水产品和畜、禽肉中氯霉素残留量检验方法气相色谱法-质谱检测法 1 方法提要 根据方法进行验证修改后,并依据欧盟指令建立了质谱测定条件，将某些关键步骤进行细化。 本方法适用于水产品和畜、禽肉组织、肠衣中氯霉素残留确证检测。用乙酸乙酯提取，提取液用正己烷净化，硅烷化后用气相色谱配有负化学源的5973N质谱检测器检测。 实验室的标准操作规程（SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素 2 实验室设备 2.1 仪器和设备 2.1.1 Agilent6890气相色谱仪：配有负化学源的5973N质谱检测器。 2.1.2 离心机：5810型，Eppendorf公司。 2.1.3 均质器：T25型，18G 刀，IKA公司 2.1.4 旋转蒸发器：R-200，BUCHI公司。 2.1.5 移液枪：200μL、1000μL、5000μL，Eppendorf公司。 2.1.6 具塞塑料离心管：15 mL 、50 ML。 2.1.7 涡流混匀器：39760型，Thermolyne公司。 实验室的标准操作规程（SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素 2.2 试剂 所有试剂均为分析纯级（有机试剂需重蒸馏），水为去离子水。 2.2.1 乙酸乙酯。 2.2.2 甲醇。 2.2.3 正己烷。 2.2.4 氯化钠。 2.2.5 无水硫酸钠：经650℃灼烧4 h，置于干燥器内备用。 2.2.6 硅烷化试剂： Sylon BFT {99% N,O-双（三甲基硅烷）三氟乙酰胺（BSTFA）+1%三甲基氯硅烷（TMCS）{美国 Supelco产品，货号33154-u，0.1mL/ampul}。 实验室的标准操作规程（SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素 2.3 标准物质 2.3.1 氯霉素（chloramphenicol）：纯度≥99%，Amresco分装，上海生工生物工程有限公司和Sigma公司。 2.4 标准溶液的配制 2.4.1 标准储备液的配制 准确称取氯霉素标样50mg置50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，混匀，浓度为1 mg/mL，4℃保存6个月。 2.4.2 标准工作溶液配制： 取1mL储备液用甲醇溶解定容到100Ml，此时浓度为1μg/mL，取1μg/mL 1mL定容至10mL，浓度为0.1μg/mL；取1μg/mL 0.5 mL定容至10mL，浓度为0.05μg/mL。 实验室的标准操作规程（SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素 3 实验方法 3.1 试样制备 从所取原始样品中取出部分有代表性样品，经充分混匀。用四分法缩分出不少于500 g试样，混匀，均分成两份。装入清洁容器内，加封后，表明标记。 3.2 测定步骤 3.2.1 提取与净化 称取5 g（精确至0.01 g）试样于50 mL离心管中。加入25 mL乙酸乙酯，用均质器均质提取2 min，4000 r/min离心3 min。将乙酸乙酯层移入50 mL鸡心瓶中，试样再加入5 mL乙酸乙酯，涡流混匀器混匀1min，合并乙酸乙酯提取液，于40℃旋转蒸发至近干。 加入1 mL甲醇溶解残渣，再加入20 mL 4% 氯化钠溶液和15 mL正己烷，用涡流混匀器混合1 min，4000 r/min离心3 min。弃去正己烷层，水层加15 mL正己烷，同上操作，弃去正己烷层。水层中加入15 mL乙酸乙酯，用涡流混匀器混合2 min，3000 r/min离心3min。吸取乙酸乙酯层，通过无水硫酸钠柱（5g）脱水于另一个50 mL鸡心瓶中，用少量乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱。于40 ℃旋转蒸发至约1 mL。 实验室的标准操作规程（SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素 3.2.2 衍生化 将浓缩液移入5 mL离心管中，用1 mL乙酸乙酯洗涤鸡心瓶，合并乙酸乙酯。于40℃吹氮气蒸发至干。加入100 μL正己烷和100 μL硅烷化试剂，于70℃烘箱中加热30min。吹氮气蒸发至干，加入0.50 mL正己烷与环己烷混合液（6：4），混匀溶解，供气相色谱测定。 3.2.3 测定 3.2.3.1 气相色谱条件 a) 色谱柱：30 m × 0.25 mm × 0.25 μm，HP-5MS； c) PTV进样口温度：70℃(1.0 min)700℃/min 250℃(6.0 min) 700℃/min 300℃； d) 载气：氦气，恒压模式，柱头压 10psi； e) 进样量：2uL 实验室的标准操作规程（SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素 3.2.3.2 质谱条件 a) 传输线温度：280?C b) 溶剂延迟： 5min c) 离子源温度：150?C d