分子诊断学遗传性疾病的分子诊断.ppt

3）非缺失型α地贫 中国人非缺失型HbH病 病因：α2基因的125位密码子CTG（亮）突变CCG（脯),妨碍α1β 1二聚体的形成，导致贫血 分子诊断方法 PCR法、ARMS法、ASA法、SSCP法、等位基因特异性扩增技术（ASPCR）法 1）重型β地中海贫血： β0/β0 和β0/β+ β链合成减少，γ链合成增加，HbF对氧亲和力高，是组织缺氧 2）轻型β地中海贫血： β0/βA 和β+/ βA 3）δβ地中海贫血：β和δ基因缺失导致β链、δ链不能合成 β地中海贫血 是β珠蛋白基因突变和部分缺失导致β链合成速率降低。 β地中海贫血的分子诊断方法 PCR-RDB法、PCR-ASO法、ASPCR法、突变寡核苷酸延伸扩增PCR（mutant oligonucleotide extention amplification, MOEA）法、多重等位基因特异PCR（multiplex allele specific PCR，MAS-PCR）法、基因芯片法 血友病（hemophilia） 多数凝血因子是蛋白质，由其有关的基因编码。由于这些基因的缺陷而使其中某一凝血因子蛋白表达降低或缺失即造成血友病 甲型血友病 概念：抗血友病球蛋白（antihemophilic globulin, AHG)遗传性缺乏所致 临床表现：出血不止 分子基础：FⅧ 由26个外显子（9kb）25个内含子（177kb）编码2351个氨基酸 分子诊断方法：基因倒位检测和非基因倒位检测 基因倒位检测：LD-PCR（长距离PCR） 非基因倒位检测：PCR-RFLP法、VNTR法、STR法、PCR-SSCP法 乙型血友病 概念：凝血因子Ⅸ 即血浆凝血活成分（PTC ）遗传性缺乏 临床表现：出血部位：肌肉、关节、深部组织 分子基础：FⅨ，长度34kb，8个外显子和7个内含子以及侧翼顺序中调控区域构成 分子诊断方法：直接和间接方法检测 直接检测方法：直接测序法、基因芯片法和毛细管电泳 间接检测方法：RFLP法、SSCP法、DGGE法、双脱氧指纹图谱、变性高效液相色谱法 肌营养不良症（hemophilia） 主要有杜氏肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy, DMD）和贝氏营养不良症（Becker muscular dystrophy, BMD） 发病机制：抗肌萎缩蛋白基因的突变导致肌细胞膜上的抗肌萎缩蛋白发生结构和功能的改变所致 抗肌萎缩蛋白基因：DMD基因包括79个外显子和78个内含子，全长约2.3×106bp，是目前已知人类最大的基因 分子诊断方法： 多重PCR技术 短串联重复序列（short tandem repeat, STR）连锁分析 定量PCR技术 RT-PCR技术 苯丙酮尿症（phenylketonuria, PKU） 主要是由于肝内苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase, PAH）严重缺失所致的苯丙氨酸代谢异常，为常染色体隐性遗传病 临床表现：智力障碍、色素减少、尿特殊气味及神经和精神症状 分子诊断方法： PCR-STR连锁分析 PCR-RFLP 多重ASPCR法 PCR-DGGE法 囊性纤维化（cystic fibrosis, CF） 由囊性纤维化穿膜传导调节因子（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR）基因突变所致 临床表现：极易发生呼吸道感染而引起气道梗阻及呼吸功能不全，多数患者仅能成活数年到10余年 分子诊断方法： PCR-SSCP法 HA法 ARMS法 反向杂交（reverse hybridization）结合酶联免疫法 OLA法 基因芯片法 亨廷顿病（Huntington’s disease, HD） 是一种有IT15基因上CAG重复序列异常扩展所致常染色体显性遗传的以舞蹈运动为主要特征的神经退行性疾病。 临床表现：进行性恶化的运动、认知及精神障碍的三联征。 脆性X综合征(fragile X syndrome, FraX) 遗传性智力缺陷疾病 FMR-1基因 分子诊断方法： Southern blotting PCR法 微卫星序列分析法 Section 3 产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷的分子诊断 产前诊断（prenatal diagnosis, PND）就是在胎儿出生以前，通过对某些特异基因进行分析，以判断胎儿是否有某种遗传性疾病的手段。 植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis, PGD） 染色体异常分子诊断 荧光原位杂交（FISH） 比较基因组杂交 间期染色体转化 单基因病的产前（植入前）分子诊断 PND和PND可诊断的单基因病 PND和PND诊断单基因