分析化学(高效液相色谱2010)(免费阅读).ppt

高效液相色谱法 （HPLC） High Performance Liauid Chromutography 二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 分配系数 K=组分在固定相中的浓度 /组分在流动相中的浓度  =CS / CM分配系数的差异是所有色谱分离的实质性原因 2.流速 一. 高压输液系统 1. 高压输液泵：恒压泵（流量随阻力变化重现性差） 恒流泵（多用）：往复式 注射式 2. 荧光检测器：多波长荧光检测器（滤光片） 荧光分光检测器（光栅分光） 氘灯作激发光源，波长范围250～600nm 应用：组分吸收一定波长紫外光后发射荧光的物质，且荧光强度与浓度成正比。 特点：灵敏度更高 检测限10-12～10-13g/ml（灵敏度比UV检测器高2~3个数量级） 选择性好 对温度和流速不敏感，可进行梯度洗脱 所需试样量少，适于痕量分析 应用范围广 3、电化学检测器 电导、库仑、极谱、安培、电位等检测器。 一、液-固吸附色谱 liquid-solid adsorption chromatograph 二、液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatograph 三、离子交换色谱 ion-exchange chromatograph 四、离子色谱 ion chromatograph 五、离子对色谱 ion-pair chromatograph 六、排阻色谱 size- exclusion chromatograph 七、亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 一、 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 二、 液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography 三、 离子交换色谱ion-exchange chromatography 四、 离子色谱ion chromatography 五、 离子对色谱ion pair chromatography 六、 排阻色谱size- exclusion chromatography 七、 亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 一、液相色谱固定相 stationary phase of HPLC 二、液相色谱流动相 mobile phase of HPLC 一、液相色谱固定相 stationary phases of LC （3）化学键合固定相 化学键合固定相的特点 2.液-固吸附分离固定相 3.离子交换色谱分离固定相 4. 空间排阻分离固定相 二、液相色谱的流动相 mobile phases of LC 2. 流动相类别 3. 流动相选择 4. 选择流动相时应注意的几个问题 毛细管电泳 　　　高压直流电场为驱动力，毛细管为分离通道 固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)； 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。 全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离 原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。 先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。 3-4 液相色谱的固定相与流动相 stationary phase and mobile phase of HPLC 1. 液-液