3.细菌的分布与外界因素对细菌的影响.pptVIP

细菌的分布与外界因素　　　　对细菌的影响 右江民族医学院微生物与免疫学教研室 实验内容 一、细菌的分布检查 1.空气中细菌的检查 2.水中细菌的检查 3.皮肤消毒试验 4.飞沫中细菌的检查 二、外界因素对细菌的影响 1.高压蒸汽灭菌法 2.紫外线杀菌试验 3.药物敏感试验 实验目的 1.掌握标准纸片扩散法（Ｋ－Ｂ）的原理、操作方法、结果的判读及临床意义． 2.掌握皮肤消毒方法． 3.熟悉人体咽喉部细菌检查方法． 4.熟悉高压蒸汽灭菌法，紫外线灭菌方法． 5.了解空气、水中细菌的检查方法． 一、细菌的分布检查了解微生物在自然界及正常人体的分布，对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。? 材 料 　 　普通琼脂平板 　血琼脂平板 MH琼脂平板 　３７℃温箱 　无菌棉签等 空气中细菌的检查（示教）水中细菌的检查（示教）取水样1ml注入无菌空平皿内加15mL已融化并冷却至约45℃的培养基混匀 倒置于３７℃温箱培养18-２４h后观察结果1.分区标记 2.接种 3.培养 飞沫中细菌的检查 　　 二、外界因素对细菌的影响当外界环境条件发生巨大改变，可导致微生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚至死亡。 1.高压蒸汽灭菌法（示教） 原理：利用密闭的金属锅，密闭加热使锅内蒸汽压力增大，温度随之升高，杀菌力增强。 手提式高压蒸汽灭菌器 高压蒸汽灭菌器 构造：为一双层的金属圆筒，两层之间盛水，外层坚厚，上方有金属厚盖。螺旋能紧闭盖门，使蒸汽不能外溢，因而蒸汽压力升高，其温度亦相应的增高。 使用方法 1.加水至外筒内，被灭菌物品放入内筒。 2.盖上灭菌器盖，拧紧螺旋使之密闭。 3.加热，同时打开排气阀门，排净其中冷空气，关闭排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所需压力时(103.4kPa,121.3℃)，保持压力和温度维持15～30min。 4.待压力自行降至零时，慢慢打开排气阀，排除余气，开盖取物。 用 途凡耐高温和潮湿的物品，如培养基、生理盐水、衣服、纱布、棉花、敷料、玻璃器材、传染性污物等都可应用本法灭菌。　　 2.紫外线杀菌试验 原理：通过紫外线的照射，破坏及改变微生物的DNA结构，使细菌当即死亡或不能繁殖后代，达到杀菌的目的。优点简单便捷、广谱高效、无二次污染、便于治理和实现自动化等优点。 缺点 穿透能力弱 材料 普通琼脂平板 18-24h细菌培养物 紫外线灯等 方 法 细菌接种于普通平板皿盖盖住半边做对照，置紫外灯下约30cm处，照射30分钟。培养 药物敏感试验进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法、稀释法、抗生素浓度法、自动化仪器等。 标准纸片扩散法（Ｋ－Ｂ） 原理：将含抗生素的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂上，药物在琼脂中扩散，在药物浓度到达的范围内对此药敏感的细菌不能生长而形成透明的抑菌圈。 不同细菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了测试菌对该药的敏感程度，并与该药物对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关。 材 料 菌种：葡萄球菌、大肠杆菌菌液 培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂） 试剂：各种抗菌药物纸片（PEN、GEN、STR、CHL) 方法 棉试蘸取试验菌涂抹在MH培养基表面，均匀涂抹3次以无菌镊子取各抗生素纸片贴于表面培养 结果判断 材料分配 * * 普通琼脂平板 血琼脂平板左边培养皿菌落是未被过滤空气中的细菌，右边是经过滤空气中留有的少量细菌 皮肤细菌的检查： 空白对照 消毒后 消毒前 常用的皮肤消毒剂 用咳碟法将咽喉部细菌接种于血平板 消毒与灭菌原理：微生物由蛋白质、核酸、脂类等构成，极易受外界条件的影响，对多种物理、化学因素都敏感。消毒与灭菌就是根据这一原理抑制或杀死外环境中的病原微生物。 注意事项：1）冷空气彻底排除； 2）压力降为“0”时方可打开。 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表 波长200～300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以265～266nm最强，这与DNA的吸收光谱范围一致。紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的二个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体，因而改变DNA的分子构型，干扰DNA的复制与转录，导致细菌的死亡或变异。 紫外线释放的能量较低，故穿透力较弱，普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线，故只能用于手术室、传染病房、细菌实验室的空气消毒，或用于不耐热物品的表面消毒。杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用时应注意防护。 紫外线杀菌试验 特点 各纸片中心距24mm,纸片距平板边缘应15mm PEN GEN