实验二-叶绿体中色素的提取和分离.pptVIP

* * * * 叶绿体中色素的提取和分离 实验目的 掌握提取和分离叶绿体色素的方法，探究叶绿体中色素的种类。 实验材料 叶绿体中色素的提取和分离 新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片)。 实验原理 叶绿体中含有两大类色素（叶绿素和类胡萝卜素），它们溶于有机溶剂，因此可选用乙醇或丙酮进行提取。 层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶绿体内的色素在层析液中的溶解度各不相同，溶解度越高，在滤纸上的扩散速度越快，反之则慢，可以将叶绿体中的色素分离开来。因此采用纸层析法进行分离。 叶绿体中色素的提取和分离 实验材料用具：1、材料：新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片)。 2、仪器：干燥的定性滤纸，烧杯(100mL)，研钵 玻璃漏斗，尼龙布（或棉花），毛细吸管，剪刀，小试管，培养皿盖，药勺，量筒(10mL)，天平，镊子，铅笔，尺子。3、药品：丙酮，层析液，二氧化硅，碳酸钙。 实验过程： 1、提取叶绿素的步骤?： （1）称：用天平称量5g除去叶柄的叶片 （2）剪：越细越好，尽量去除叶脉等部分 （3）加药品：加少量二氧化硅，碳酸钙和丙酮（约5mL）快速充分研磨。 （4）磨：研磨要领是要用力压快速研磨。 （5）过滤：用纱布（或棉花）、漏斗和试管，最后提取液置于试管中待用，及时用棉塞（或塞子）将试管塞严 . 1、约5克的菠菜緑叶，剪碎，放入研钵中。 2、研钵中加入少许二氧化硅和碳酸钙，再加入10mL无水乙醇。 3、迅速研磨。 4、将研磨液迅速倒入玻璃漏斗中进行过滤，将过滤液收集到烧杯或试管中。 2、分离色素的步骤 ①制备滤纸条：将预备在试验桌上的滤纸条一端剪去两个角作标记，在距离这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。 ②画滤液细线：沿铅笔线轻轻均匀地画一道线，每次划完尽量吹干，用提取液反复划好几次，不要弄破纸条。 ③层析分离叶绿体中的色素：将3mL层析液倒入烧杯中，注意将纸条画有滤液细线的一端置于烧杯中的层析液中，注意千万不要将滤液细线浸没在层析液中。 ④（干燥后）观察实验结果： 四条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，四种色素分别是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b 叶绿体中色素的提取和分离 实验结果 问题讨论：  1、加入SiO2、CaCO3的作用是什么？2、 将滤液放在试管中，为什么要及时用棉塞将试管塞严？ 3、?画滤液细线时重复画几次的目的是什么？1、加入SiO2、CaCO3的作用是什么？二氧化硅的作用是使研磨更加充分、迅速；碳酸钙的作用是保护叶绿素不分解 2、 将滤液放在试管中，为什么要及时用棉塞将试管塞严？滤液含有丙酮，丙酮有毒，防止挥发 3、?画滤液细线时重复画几次的目的是什么？增加色素的含量，使分离后的色素带更加清晰 问题讨论： 问题讨论：  4. 为什么不能让滤液细线触及层析液？5.观察实验结果有什么现象？滤纸条上出现了几条色素带？每条色素带的颜色和排序如何？ 。 问题讨论：  4. 为什么不能让滤液细线触及层析液？层析液会溶解色素使色素无法分离； 5.观察实验结果有什么现象？滤纸条上出现了几条色素带？每条色素带的颜色和排序如何？滤纸条上将分离出四条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，四种色素分别是胡萝卜素（最快）、叶黄素、叶绿素a（最多）和叶绿素b（最慢）。 绿叶中的色素 类胡萝卜素 （含量约1/4） 叶绿素 （含量约3/4） 胡萝卜素（橙黄色） 叶黄素（黄色） 叶绿素a（蓝绿色） 叶绿素b（黄绿色） 实验关键: 1.选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片.(如菠菜叶) 2.画滤液细线时应以细、齐、直为标准，重复画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复2-3次。 3.层析时不要让滤液细线触及层析液。 随堂演练 ： 1.通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现四条色素带，从上到下依次为（ ） A.胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b B.胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素 C.叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素 D.叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素 2.下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验描述中，不属于实验要求的是 （ ） A.提取高等植物叶绿体中的色素 B.用纸层析法分离色素 C.了解各种色素的吸收光谱D.验证叶绿体中所含色素的种类 3.用纸层析法将色素进行分离,在滤纸条上出现的最窄的一条色素带的颜色是 （ ） A.黄色 B.橙黄色C.黄绿色D.蓝绿色 4.提取叶绿体中的色素时要加丙酮，其原因是 （） A.让色素溶解B.防止叶绿素被破坏 C.便于将叶片研磨成匀浆D.促使叶绿体中色素分离 5.在叶绿体色素的提取和分离实验中，在滤纸条上扩散速度最快的色素是（）A.叶绿素aB.叶绿素bC.胡萝