四、抗菌药物敏感性试验.doc

推荐资源，今日三农网，/。三农信息综合门户网站。 四、抗菌药物敏感性试验 （一）药敏试验的目的 测定病原微生物对化学治疗药物敏感性的试验称为化疗药物敏感性试验（Drug sensitivity test），简称药敏试验。药敏试验的主要目的是：① 用于测定新的抗菌药物或制剂的抗菌谱；② 对病灶分离菌进行流行病学调查，主要应用于测定细菌经过多年后敏感性的变化情况和地区特异性；③ 在临床治疗感染性疾病时，针对病原菌选择合适的首选药物品种。 （二）药敏试验的原理及种类 药敏试验是通过培养基培养的细菌确定细菌对药物的敏感性方法。将被检菌接种在适当的培养基上，然后加上不同种类或不同浓度的抗菌药物（或制剂），观察细菌生长发育的速度和程度。用药后，细菌在培养基上停止生长并且死亡，抑菌圈清晰，说明细菌对药物敏感，药物表现有较强的杀菌作用；用药后，细菌停止生长，但液体培养基经过一定时间后还可能出现浑浊或固体培养基上的抑菌圈不清晰，说明细菌对药物比较敏感，预示药物对被检细菌只是起抑菌作用。通常判定一种药物对细菌的杀菌或抑菌作用的强度指标是固体培养基中抑菌圈的大小，但这也不是绝对的，因为抑菌圈的大小与药物对培养基的渗透性是密切相关的。 药敏试验方法较多，但在原理上不外乎是稀释法和扩散法两大类。而扩散法（包括纸片法、管碟法）通常适用于临床治疗选择药物。 （三）常用培养基制作法 1．普通肉汤培养基 牛肉浸膏 3.0克 蛋白胨 10.0克 氯化钠 5.0克 蒸馏水 1000毫升 放在三角烧瓶中，微温溶解后，调节pH值至7.4~7.6，煮沸10分钟，冷却后的pH值为7.2±0.2。15磅压力下灭菌15分钟（115℃灭菌30分钟）即得。 本培养基可用作为固体、鉴别、选择等培养基制造的基础原料，大部分细菌都能在其中生长。 普通肉汤琼脂培养基 照上述普通肉汤培养基的配方及制法，加入15~20克琼脂，加热溶解后，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。 3．0.5%葡萄糖肉汤培养基 蛋白胨 10克 氯化钠 5克 葡萄糖 5克 牛肉浸膏 3克 蒸馏水 1000毫升 微温溶解后，调节pH值至弱碱性，煮沸后，加葡萄糖溶解，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。 4．马丁氏（Martin’s）肉汤培养基 蛋白胨液 500毫升 肉浸液 500毫升 冰醋酸 1毫升 醋酸钠 6克 葡萄糖 10克 将蛋白胨与肉浸液混合，加热至80℃，加冰醋酸1毫升，搅拌均匀，再煮沸5分钟，加15%氢氧化钠20毫升，调整pH至7.2。加醋酸钠6克，再调整pH至7.2。继续煮沸10 分钟，用滤纸过滤，每1000毫升滤液加葡萄糖10克，分装于500毫升三角烧瓶，高压蒸汽灭菌（15磅）15 分钟。 本培养基可用作传染性胸膜肺炎病原体等的分离与培养。 5．革兰氏阴性菌（G-N）增菌培养基 胰蛋白胨 20克 去氧胆酸钠 0.5克 葡萄糖 1克 无水磷酸二氢钾 4克 甘露醇 2克 无水磷酸氢二钾 1.5克 枸橼酸钠 5克 氯化钠 5克 水 1000毫升 将各组分加热溶化，调整pH值至7.0，用滤纸过滤；分装于18×100毫米小试管中，每管约1.5毫升，高压蒸汽灭菌（15磅）15 分钟，置冰箱备用。 用于粪便选择性疾病杆菌，样本接种后，最初6小时无论在室温还是在37℃都有增菌作用。而在这一时期中，大肠杆菌和变形杆菌等生长很少，故在6小时后，再作用平板分离。 （四）临床用药选择药敏试验法——扩散法（Diffusion method） 扩散法是在琼脂培养基（多采用平板培养基）上接种被检菌，将药物（药剂）配成一定浓度加在培养基上，培养一定时间后观察接种菌是增殖还是抑制.这是测定药物（药剂）对被检菌抗菌力强度的方法，本法可用于多种药物（药剂）对一种细菌的抗菌作用进行同时测定，有利于为临床选择药物。 首先把可流动的固体培养基（加热后的固体培养基）平铺在平皿内冷却使其凝固，在