实验三通课-2013-4幻灯片.ppt

使用方法： ①加水至锅内达规定的水平面，放入欲灭菌物品，以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使锅盖均匀密闭。 ②用电炉加热，同时打开排气阀门，使冷空气逸出。待冷空气全部排出后，关闭排气阀。 ③继续加热注视压力表，器内压力又逐渐升高，直到压力表指在所需数字即调节热源，维持15～20min． ④停止加热，待压力自行下降至零时方可徐徐开放排气阀，排尽余气，打开锅盖，取出灭菌物品。 注意事项： 锅内物品不宜过紧。 注意排出冷气，否则气压表虽已达15磅，温度达不到121.3℃，不能保证灭菌效果。 灭菌后排气不能过急，以免容器内液体外溢或引起破裂。 不耐高热高压之物品，不能用此法。 紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。 紫外线中波长265-266nm的杀菌作用最强。 杀菌机制：引起DNA链上相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而干扰DNA的复制和转录，导致细菌死亡。 密涂接种 双糖铁培养基 双糖铁培养基的用途 用于观察细菌对葡萄糖及乳糖的发酵 能力（产酸产气）。 用于观察细菌是否产生硫化氢。 大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验）,斜面及低层均呈黄色并有气泡。 沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖,不发酵乳糖,分解葡萄 糖产的酸使培养基PH下降,酚红指示剂变黄,但是培养 基中的葡萄糖仅有0.1%,斜面的酸性物质被氧化成 挥发性酸,且细菌氧化氨基酸物质产生的氨的中和作 用,斜面变红,而底层则为黄色。 细菌分解含硫氨基酸生成的硫化氢可以和FeSO4反应生成FeS黑色沉淀。 Double suger iron slant 1.标本的采集 粪便标本 SS培养基 2.分离培养 观察菌落特点 革兰染色(形态学鉴定) SS平板 接种双糖铁培养基（生化反应） 玻片凝集试验（血清学鉴定） 一、观察上次实验内容 二、双糖铁培养基的接种 方法：穿刺+斜面 接种针挑取单个菌落，沿培养基中心垂直插入至距离管底0.5cm处，原路退出。 接种环挑取单个菌落，自斜面底部向上划一直线，然后再从斜面底部向上轻轻来回作蜿蜒划线。 培养18-24小时，观察结果并分析。 注意：1. 应在菌落稀疏部位挑取单个菌落。 2. 穿刺和斜面接种原则上应为同一个菌落。 3. 不同的小组可以选择不同颜色的菌落来接种。 四、挑取可疑菌落进行革兰染色 每组同学各选取一个大小和颜色 不同的菌落 每人一张玻片 五、结果判断 SS平板：菌落的形态、大小、颜色； 革兰染色：形态，排列，染色特点； 双糖铁培养基上生化反应特点； 玻片凝集试验结果。 操作内容 药 敏 试 验 方法： 标记分区 密涂接种 贴片 培养 结果观察 1.标记分区 2.密涂接种 3.贴片 4.培养 6.注意事项 接种时均匀密涂。 贴片时，用无菌镊子轻轻触压药物纸片使之与培养基充分接触。 镊取药物纸片时一旦掉到培养基表面，则继续保持其位置，切勿镊起重新放置，以防不同抗生素交叉影响。 1.观察菌落特征（SS平板）。 2.将可疑菌落接种于双糖铁培养基上（穿刺+斜 面），37℃培养24h，观察结果。 1支/台 3.玻片凝集试验。 1片/人 4.取可疑菌落做革兰染色。 1片/人 注意：按照上面的顺序依次进行实验。 目的： 1.掌握：纸片扩散法药敏试验的原理及结果判定； 2.了解：药敏试验的操作方法和意义。 原理： 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。 主要材料： 1.普通琼脂平板 2.含抗生素的滤纸片： 青霉素 氯霉素 链霉素 庆大霉素 底部观 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。 顶部观 顶部观 37℃温箱， 倒置培养18-24h。 * * 一、物理因素对细菌的影响 (1.5学时) 1.高压蒸汽灭菌法（两个实验室一台） 2.紫外线杀菌实验（普通平板：4个） 二、肠道致病菌的鉴定(2.5