实验二 PMSG生物效价测定幻灯片.pptVIP

实验二 PMSG生物学效价的测定 一．实验目的 掌握用生物测定法测定PMSG的生物学效价。 二．实验原理 PMSG含有FSH、LH成分，因此具有FSH、LH相似的生物学作用，即能促使性成熟前的小鼠子宫增大、促进卵泡发育、排卵和黄体的形成； 对雄性动物具有促进精细管发育和性细胞分化。 三、测试材料 （一）实验动物：取健康无伤残的24－28日龄(即将达到性成熟日龄)、体重12－15g，同源雌幼小鼠。各测试组内的实验鼠出生日龄相差不得超过5天，体重相差不得超过3g。 (二)测试样品：孕马血清PMSG生物制剂。 (三)器械及药品：1ml注射器、4号针头、0.1ml微量注射器、1ml和2ml吸管，酒精棉球、生理盐水、剪子、大号镊子、带齿小镊子、鼠解剖台(或用小木板及图钉)、玻璃片(20×30cm)，鼠罐、小玻瓶。 四、测试方法 （一）测试组的确定：每取0.1ml孕马血清（0.5 IU/μl），按表加入不同量的生理盐水，稀释成不同浓度，作为各测试组。 （二）对照组：注射生理盐水。 测定的方法： 生物测定法、细胞培养生物测定法、 免疫测定法、受体测定法 五、检定方法 (一)注射 1．注射次数 按各测试组要求，按照稀释成不同浓度的一定剂量。每个测试组需注射3只雌幼小鼠，孕马血清只作一次注射。 对照组亦为3只雌幼小鼠，在每次给各测试组小鼠注射的同时，注射同样剂量的生理盐水。 2．注射部位 按照各组要求的药物剂量,准确地注射于小鼠的皮下,注意不得将药液注射于胸腔或腹腔内，亦不可溢漏于体表。 3．剂量 每只小鼠注射剂量为0.2ml。 4．注射方法 用手指捏住小鼠的头及尾部固定之，以酒精棉球消毒其背部,提起皮肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头微向上挑起不露出针尖时，再注入药物。随着药物的推入，在皮下可看到鼓起一个小泡，即证实药物确已注入皮下部位。注射针头宜选用小号细针头,以防止注射后的药液从针孔处逸出。 (二)剖检 1.剖检时间 测试小鼠应在注射药物后的72-78h内进行。 2.剖检步骤 (1)处死小鼠 采用颈椎脱臼法处死小鼠。将小鼠头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱臼的振动。也可采用将小鼠头部经撞击致死。然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上或鼠解剖台上。 (2)剖腹 将处死并固定好的小鼠，沿腹中线剪开腹腔，向前方揭去肠胃内脏，即可在肾脏后方看到两侧呈乳白色的卵巢及与输尿管相平行的两子官角。 (3)组织剥离 将卵巢及子宫周围的组织剥离，于膀胱后的阴道段剪断，向上提起即可将子宫及卵巢摘出。 (4)剔除附属组织 按各测试组的顺序，将摘出的子宫平置于玻璃板上，剔除子宫周围的附属组织。为了防止子宫干涸，可滴上数滴生理盐水浸润。 (三)效价确定 将各测试组雌幼小鼠的子宫与对照组子宫相对比观察。在每组3只雌幼小鼠中，若有2只鼠的子宫增大一倍者，则确定该组为阳性反应组。根据各测试组中以呈阳性反应的最低浓度组的效价值，换算出每毫升孕马血清中含有的小鼠单位。 取最低有效剂量组，将其分母×5，即为1ml血清样品中含PMSG的小鼠单位数。 表1 孕马血清稀释倍数折算鼠单位表 组别 每0.1ml血清中加入生理盐水量(ml) 稀释后血清浓度 每鼠注射量（ml） 注射鼠数（只） 实际鼠体内血清量（ml） 每ml血清中含有小鼠单位 1 0.9 1/10 0.2 3 1/50 50 2 1.2 1/13 0.2 3 1/65 65 3 1.5 1/16 0.2 3 1/80 80 4 1.8 1/19 0.2 3 1/95 95 5 2.1 1/22 0.2 3 1/110 110 6 2.4 1/25 0.2 3 1/125 125 7 2.7 1/28 0.2 3 1/140 140 8 3.0 1/31 0.2 3 1/155 155 9 3.3 1/34 0.2 3 1/170 170 10 3.6 1/37 0.2 3 1/185 185 组别 每0.1ml血清中加入生理盐水量(ml) 稀释后血清浓度 每鼠注射量（ml） 注射鼠数（只） 实际鼠体内血清量（ml） 阳性小鼠数量（只） 1 0.9 1/10 0.2 3 1/50 2 1.5 1/16 0.2 3 1/80 3 2.1 1/22 0.2 3 1/110 4 2.7 1/28 0.2 3 1/140 5 3.3 1/34 0.2 3 1/170 6 对照组 3 0 动物科学1001班 0. 2 组别 每0.1ml