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实验五 植物细胞骨架的光学显微观察 一、实验目的： 观察光学显微镜下细胞骨架的结构，了解显示植物细胞骨架的方法及其原理。 二、实验原理： 细胞骨架概念： 在细胞中支持和连接细胞各组分，以及与细胞运动有关的结构，它包括微管、中间纤维、微丝。当用适当浓度的Triton X一100处理时，可将细胞内大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白质却仍被保存，经过固定和考马斯亮蓝R250染色，从而在光镜下观察到细胞骨架的网状结构。 三、实验用品： 器材：显微镜、烧杯等。 试剂： M一缓冲液、6m mol／L PH6．8磷酸缓冲液、1％Triton X一100、0.2％考马斯亮蓝R250、3％戊二醛、5％、7％、95％乙醇、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶 材料：洋葱鳞茎 四、实验方法： 1、 取材：取洋葱鳞茎内表皮 (大小约lcm2)若干片装于放有 PH6．8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。 2、吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X一100处理20—30分钟。 3、吸去Triton X—loo，用M一缓冲液洗3次，每次10min ． 4、3％戊二醛固定0.5—1小时，(对照组开始处理)。 5、PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。 6、用0．2％考马斯亮蓝R250染色20—30分钟。 7、用蒸馏水洗1—2次，材料置于载玻片上，加盖玻片，即可镜检。 如作永久制片，可使样品，顺序通过如下试剂：50％乙醇，70％乙醇、95％乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液(1：1)，每次5一10分钟，或正丁醇→正丁醇二→甲苯二→甲苯，每次5—10分钟。然后捞取样品，平展于载玻片上，中性树胶封固。 * *
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