实验二 气孔状态观察幻灯片.ppt

气孔密度：单位叶片面积上的气孔数 （显微镜视野面积内观测到的气孔数） 2.1 印迹法 2.2 固定法 2. 3 K+ 对气孔开度的影响 蚕豆叶片，竹叶菜（Commelina ?benghalensis） 载玻片、盖玻片、显微镜、测微尺、培养皿 印迹法：火棉胶、棉花球、镊子、刀片； 固定法：无水酒精、镊子 0.5% KNO3、NaNO3溶液 光源（生长箱或自然光） 将火棉胶均匀涂抹于叶片下表皮表面，风干2 min，用镊子揭开一层薄膜； 将薄膜平铺在稍有湿润(哈气)的载玻片上，压上盖玻片，镜检； 低倍镜下选视野，高倍镜下观察记数，观察3个视野的气孔数目。 5） K+、Na +对气孔开度的影响 3个培养皿中分别放0.5%KNO3、0.5%NaNO3溶液和蒸馏水各15 ml； 每个培养皿放2~3 张从相似叶位/相近大小的叶片上取下的下表皮； 25℃下，光照处理60 min； 依次制片和镜下观察气孔开度，记录与开度相应的目尺格数。每个处理随机观察5个气孔。 表1 不同方法观察的气孔密度 1）比较印迹法和固定法测定的气孔密度，如果两者结果有差异，试加以分析。 1）印迹法和固定法两种方法观察到的气孔密度， 哪个大？为什么？ 2）哪种溶液中气孔开度最大？为什么？ * * 1. 实验材料准备不足，影响了实验完成。 2. 怀疑铝盒在烘干前有水分，为何不称一下烘干后的铝盒重量呢？可以换算出来正确的鲜重和干重。 3. 试管的刻度不准确，应该用移液管来统一量取。 4. 结合含水量和水势进行比较分析。 实验一 环境因素对植物水分状态的影响 存在问题： 实验二 气孔运动的调节 （Ⅰ）气孔密度的观察 （Ⅱ）钾离子对气孔开度的影响 肾形 （双子叶植物） 哑铃形 （单子叶植物） 气孔开度：保卫细胞内壁间跨距 开度 不同植物气孔的数目和大小 掌握测定气孔密度和开度的方法； 学会分析影响因素对气孔运动的调节； 学会利用显微镜物镜测微尺（物尺）标定目镜测微尺（目尺）的方法。 1. 实验目的 以有机物质的溶胶（火棉胶、牛皮胶、醋酸纤维素胶、指甲油等）涂在植物的表面, 胶体风干后凝成薄膜，这层膜上印有表皮组织各细胞的界迹边痕，从而显示出气孔的开闭情况 。将印膜撕下，供观察和测量。 除用来观察气孔状况外，还可用于观测植物表皮上的细胞、茸毛、蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。 优点: 非破坏性取样；方便快捷。 缺陷: 界迹边痕不明显的样品印迹模糊；凹陷气孔难以取到印迹； 清晰薄膜制作有难度。 2. 实验原理 优点: 镜下观察较印迹法的醒目；植物材料可长期保存；凹陷气孔仍可观察。 缺陷: 破坏性取样；不适用于下表皮难于剥离的样品观察。 无水乙醇能使植物细胞迅速脱水、死亡，因而细胞壁硬化、细胞形状固定，气孔也得以保持原形，有利于以后镜检研究 。 气孔运动的机制（4种假说）: 淀粉与糖转化学说 K+积累学说 苹果酸代谢学说 玉米黄素假说 在光下，保卫细胞中的叶绿体通过光合磷酸化生成ATP，ATP驱动质膜上的K+-H+泵，使保卫细胞能逆浓度梯度从周围表皮细胞吸收K+，或从外界溶液中吸收K+ ，从而降低其渗透势，促进保卫细胞吸水，气孔开放。 K+在保卫细胞的积累，可以促进气孔开放。 Na+可以代替K+，使气孔开放，但效果如何？ K+积累学说 3. 材料、仪器设备与试剂 目镜测微尺(目尺)：是一块可放在目镜内隔板上的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。 用以测量经显微镜放大后的物像大小。刻度大小随放大倍数变化而改变。 物镜测微尺(物尺)：是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长10μm。 实际长度不受放大倍数影响。专用于校正目镜测微尺 (目尺)每格的相对长度。 目镜测微尺 物镜测微尺 4. 实验步骤 1）计算显微镜视野直径和面积（ 40×，物尺） 物尺放在视野直径线计算直径，视野面积S=π(d/2)2。 2）用物尺标定目尺（ 40×） 由于不同显微镜镜筒长度不同，或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目尺每小格所代表的实际长度也不一样。 因此，用目尺测量物体大小时，必须先用物尺校正，以计算出在一定放大倍数目镜和物镜下目尺所代表的实际长度，然后才能用来测量物体大小。 低倍镜下找到物尺，并移至视野中部，高倍镜下标定目尺。 目尺每格＝10 ×20/ 29（μm） 目尺 物尺 每格10μm 目尺29格对物尺20格 视野10格目尺 r = ? 计算气孔密度 17格目尺对应6 格物尺 目尺每格＝ 6×10 / 17 （um） 测气孔大小 目尺17格 物尺6格 计算气孔开度 ？μm 3）印记法观