总胆汁酸检测90423幻灯片.pptVIP

1 燕 德 起 血清总胆汁酸的检测 酶比色法测定总胆汁酸 循环法测定胆汁酸 酶比色法测定总胆汁酸 【原理】 在3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)作用下，各种胆汁酸C3上α位的烃基(3α-OH)脱氢形成碳基(3α=O)。同时NAD还原成NADH。随后，NADH上的氢由黄递酶催化转移给碘化硝基四氮唑(INT)，产生红色的甲臢。甲臢的产量与总胆汁酸(TBA)成正比，在500nm波长比色。反应式如下： 3α-羟基胆酸 + NAD+ 3-氧代胆酸 + NADH + H+ NADH + H+ + INT NAD+ + 甲臢 (红色) 酶比色法测定总胆汁酸 【试剂】 1．试剂Ⅰ 黄递酶 1 000U，NAD+ 1 mmol，碘化硝基四氮唑(INT)0.5 mmol, 丙酮酸50 mmol溶于0.1mol pH 7.5 的磷酸缓冲液1 L中，加表面活性剂适量。 2．试剂Ⅱ 3α- 羟类固醇脱氢酶(3α-HSD) 2 000U溶于0.1mol pH 7.5的磷酸缓冲液中1 L中。 3．终止液 1 mol/L HCl。 4．标准液(50μmol/L) 24.38 mg甘氨胆酸溶于1 L经透析的混合血清中。 酶比色法测定总胆汁酸 【操作步骤】 1．手工法按表 加入物(ml) 测定 测定对照 标准 标准对照 血清 0.1 0.1 a 标准液 0.1 0.1 b 试剂Ⅰ 0.3 0.3 0.3 0.3 c 试剂Ⅱ 0.1 0.1 d 去离子水 0.1 0.1 e 混匀，37℃水浴10min，加终止液0.1ml，摇匀，500nm波长，以水校零，读取各管A值。 2．自动分析法 一般无法做对照管，而是设置两点终点法，读取前后两个吸光度A1和A2。具体按说明书要求。 酶比色法测定总胆汁酸 【计算】 手工法： TBA(μmol/L) =A测定-A测定对照/A标准-A标准对照×C标准 自动分析法： TBA(μmol/L) =A测定2-A测定1/A标准2-A标准1×C标准 【参考范围】 60名健康成人的空腹TBA为4.9±2.38μmol/L, 中餐后2h TBA为8.22±2.91μmol/L。 酶比色法测定总胆汁酸 -----临床意义 胆汁酸的生成和代谢与肝脏生理关系密切，血清胆汁酸水平是反映肝实质损伤的一个重要指标。血清总胆汁酸(TBA)测定对肝病的诊断有十分重要的价值。 1．急性肝炎：急性肝炎时血清TBA显著增高，可达正常人水平的10～100倍，甚至更高，急性肝炎初愈患者血清TBA由最初的高值几乎与AST在同一时间降至正常水平，若持续不降或反而上升者则有发展为慢性的可能。 2．慢性肝炎：慢性肝炎分为轻度、中度和重度三个类型，空腹总胆汁酸(F-TBA)和餐后2h总胆汁酸(P-TBA)测定对慢性肝炎的分型、监测、预后及疗效有着重要意义。 酶比色法测定总胆汁酸 -----临床意义 3．肝硬化：肝硬化时，肝脏对胆汁酸的代谢能力减低，血清TBA在肝硬化的不同阶段均增高，增高幅度一般高于慢性活动性肝炎。即使在肝硬化晚期亦如此。当肝病活动降至最低时，胆红素、转氨酶及碱性磷酸酶等指标转为正常，血清TBA仍维持在较高水平。 4．乙醇性肝病：乙醇性肝病血清TBA可增高，当乙醇性肝病(包括肝硬化)发生严重的肝损伤时，血清TBA明显增高，而轻、中度损伤增高不明显。有报道认为，血清TBA测定对乙醇性肝病肝细胞损伤诊断的可信度和灵敏度远优于各种酶学检查和半乳糖耐量试验等指标，甚至建议将血清TBA再加上β-氨基己糖苷酶作为乙醇性肝病的诊断指标。有人认为，餐后60min-TBA测定对乙醇性肝病诊断更有意义。 酶比色法测定总胆汁酸 -----临床意义 5．中毒性肝病：在中毒性肝病时血清TBA也将异常。 6．胆汁淤积：血清TBA测定对胆汁淤积的诊断有较高灵敏度和特异性。