不同公司糖尿病相关指标样品处理.docx

样品处理汇总表注：以下汇总了国际主流的糖尿病检测试剂盒的品牌如：日本shibayaji，美国crystalchem，merck millipore，美国ALPCO,?瑞典mercodia；??一、?样本基本处理方式:样本类型General Protocol作用部分试剂盒推荐血清静脉穿刺取血，待血液凝集完全后离心样本基本收集方式，不加抑肽酶也可，但样本容易降解CRYSTAL CHEM insulin，mercodia insulin，Alpco insulin，Millipore insulin?血浆静脉穿刺取血，加入抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸钠）离心，推荐用EDTA?和柠檬酸钠血清，血浆+抑肽酶1ml?血清或抗凝血浆中加入10ul储存样品时加入抑肽酶可提高样品稳定性（可以作为insulin样本收集的基本方法）例如：Shibayagi- Insulin ELISA Kit，?Leptin ELISA Kit,?其他糖尿病检测试剂盒（除活性GLP-1?检测）血清，血浆+抑肽酶+DPP-IV抑制剂每毫升血浆需加10ul DPP-IV可检测活性Active –GLP-1采集血浆时加入DPP-IV抑制剂可以提高?活性GLP-1的稳定性Milliproe- GLP-1 (Active) ELISA Kit Shibayagi- GLP-1 (Active) ELISA Kit抗凝管采集血浆时使用抗凝管可减少血液凝血（也可不用）非必需Mercodia- Glucagon ELISA Kit?，CRYSTAL CHEM- Rat GLP-1 ELISA Kit?二、?样品稳定剂的使用方法：?A.?抑肽酶AprotininB．DPP_IV抑制剂C. P800抗凝管品牌国产品牌MilliporeBecton Dickinson货号A8260DPP436642规格5mg1mL100个储存贮存液：5mg用500ul?水复溶，终浓度10mg/ml，pH7-8，4℃?4℃?密封保存使用方法1ml?血清或抗凝血浆中加入10ul，5mg可处理50ml样品每毫升血浆需加10ul DPP-IV?采集血浆时收集血液三、?糖尿病检测的常规问题：1.?为什么检测insulin?的时候，样本中要加抑肽酶？抑肽酶（Aprotinin），又称为抑蛋白酶肽，是一种竞争性、可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂，可与丝氨酸蛋白酶形成稳定复合物并阻断酶的活性位点，抑制糜蛋白酶、胰蛋白酶、激肽释放酶和血纤维蛋白溶酶，降低底物分解速度。在ELISA Kit中广泛的用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解。2.?为什么要检测总GLP-1?和活性GLP-1？?人胰高血糖素类多肽-1(GLP-1)是天然前原胰高血糖素?preproglucagon?蛋白的组成部分。临床试验表明在?2?型糖尿病用磺酰类降糖药无效的病人中,外源性给予?GLP-1?可有效地降低血浆葡萄糖浓度,短暂升高胰岛素和C-肽浓度。对肥胖老年?2型糖尿病?,?特别是胰岛素抗性患者, GLP-1?有降血糖、降糖化血红蛋白、果糖胺,?增加胰岛素受体敏感性等有益作用。 GLP-1(1-37)?是无活性的肽链，需进一步水解切除6?个氨基酸，成为具有生物活性的?GLP-1(7-37)?，其中一部分分子?C-端的一个氨基酸被分解，余端被酰胺化为具有生物活性的?GLP-1(7-36)?酰胺。GLP-1与胰高血糖素有50%的同源性，由30?个氨基酸残基组成的蛋白。GLP-1?的空间构象与胰高血糖素相似，其N-端区域具有结合?GLP-1?受体和促进胰岛素合成、释放的作用; C-端区域不具有结合?GLP-1?受体的功能，促胰岛素释放作用极弱。3.?检测总GLP-1和活性GLP-1?时样本的收集有何不同？?为什么？检测活性GLP-1时需要加入DPP IV抑制剂，因为GLP-1的两种活化形式GLP 1(7-37)和GLP 1(7-36) amide稳定性较低，非常容易被内源性DPP IV所降解。Active GLP-1 ELISA Kit?的抗体只检测GLP 1(7-37)和GLP 1(7-36) amide两种形态，加入DPP IV抑制剂可保持两种活化形态的稳定性。而检测总GLP-1则不需加DPP IV抑制剂，因为Total GLP-1 ELISA Kit?的抗体可以检测所有类型的GLP-1。4.?检测糖尿病的动物模型一般是什么样的？为什么糖尿病试剂盒对样本量和灵敏度的要求比较高？动物模型一般选择小鼠或大鼠。由于糖尿病相关指标的检测通常是动态检测各时期表达情况，并且建模动物一般为老鼠，所以在不影响建模动物正常生理状态下，每次所取的样品数量有限。另外，在糖尿病指标检测的同时还要需要检测建模动物的血糖指标，所以使得这一类ELISA检测的样本量非常少，相应的其EL