动物细胞培养和核移植技术(上课用)39792.ppt

动物细胞生长特点： 细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。细胞贴壁过程 动物细胞生长特性 原代培养 定义：把第1代细胞的培养与10代以内的细胞培养统称为原代培养。 传代培养 定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养 二、动物细胞培养条件 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境：O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） * 2.2 动物细胞工程 1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用 2、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的 学习目标： 动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养技术、 动物细胞核移植技术、 动物细胞融合技术、 生产单克隆抗体技术 复习： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养技术、 植物体细胞杂交技术 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 一、动物细胞培养过程 阅读“动物细胞培养过程”并思考：1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？ 特点是什么？2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？6、简述动物细胞培养的操作过程 动物细胞培养过程： 原代培养 传代培养1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。原理是细胞增殖 （有丝分裂） 。 聚焦一、动物细胞培养过程 那么什么是接触抑制？ 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排出代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难。 一、动物细胞培养过程3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。 一、动物细胞培养过程 4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 一、动物细胞培养过程5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺盛，容易培养。 一、动物细胞培养过程 6、动物细胞培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 动物细胞培养不能 最终培养成生物体 传代培养一般传至10代直至50代就不能再分裂了，这时细胞核内遗传物质未发生变化，形成的细胞群 传代培养过程中有个别细胞传至50代以后，由于遗传物质改变，失去控制，成为无限增殖的不死的癌症细胞，形成的细胞群7、什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？ 原代培养：取材（动物组织） →细胞分散→初次培养 传代培养：培养的细胞→细胞分散→继续培养 进行传代培养的原因：接触抑制 一、动物细胞培养过程 8、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的主要区别是什么？细胞癌变,失去接触抑制特性。 一、动物细胞培养过程9、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？不可以，因为高度分化的动物细胞的全能性受到抑制。不需要诱导其脱分化。 一、动物细胞培养过程 过程：从动物机体中取出组织 ? 剪碎 ? 加胰蛋白酶? 细胞游离 ? 加培养液 ? 将细胞接种到培养瓶内 ? 培养（1—2天换一次