兽药残留的检测方法(定稿文件).doc

说 明 书 摘 要 本发明提供一种兽药的检测方法，所述方法包括如下步骤：（1）样品的处理：将待测样品进行前处理，加入提取剂后经过多个步骤处理得到上清液过滤得到的滤液用于UPLC-MS/MS测定；（2）兽药残留的测定，将得到的样品在一定的测定条件下进行超高效液相色谱与质谱联用的测定。本发明的检测方法具有灵敏度高，专属性强的特点，能够满足兽药残留的测定。 权 利 要 求 书 一种兽药残留的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： （1）样品的处理：将待测样品进行前处理，加入提取剂后进行匀浆，之后进行超声提取，之后进行第一次离心分离得到上清液，用氮气将上清液吹干后得到的残余物用初始流动相溶解，混匀，之后进行第二次离心分离得到上清液，取上清液进行微孔滤膜过滤得到的滤液用于UPLC-MS/MS测定； （2）兽药残留的测定 将步骤（1）得到的样品进行超高效液相色谱与质谱联用的测定，测定条件如下： 色谱条件：色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18柱；流动相为甲醇和甲酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱； 质谱条件：电喷雾离子源(ESI+)；源温为105℃-115℃；脱溶剂温度为340℃-360℃；脱溶剂气流速度为600L·h-1-700L·h-1；锥孔反吹气流速度为45 L·h-1-55L·h-1。 如权利要求1所述的兽药残留的检测方法，其中所述兽药为四环素类药物、β受体激动剂类药物、喹诺酮类药物、磺胺类药物。 如权利要求1或2所述的兽药残留的检测方法，其中所述兽药为四环素、土霉素、金霉素、强力霉素、特步他林、西马特罗、沙丁胺醇、菲诺特罗、莱克多巴胺、氯丙那林、克伦特罗、妥布特罗、喷布洛尔、苯乙醇胺A、培氟沙星，环丙沙星，恩诺沙星，氧氟沙星，伊诺沙星、吡哌酸、萘啶酸、西诺沙星、诺氟沙星、达氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、沙氟沙星、司帕沙星、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基噁唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺氯达嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺醋酰、磺胺二甲异噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺二甲氧嘧啶和/或磺胺喹噁啉中的一种、几种或全部。 如权利要求1-3任一项所述的兽药残留的检测方法，步骤（2）所述梯度洗脱程序为： 0-10.0 min：甲醇的体积比为3.0％-90.0%； 10.0-10.1min：甲醇的体积比为90.0％-3.0％； min：甲醇的体积比为3.0％。 如权利要求1-4任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（1）所述氮气吹干上清液的温度为25℃-35℃，优选在30℃下进行。 如权利要求1-5任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（1）所述第一次离心和第二次离心的转速为9000 r·min-1-11000 r·min-1，离心的时间为8 min -12min，优选所述第一次离心和第二次离心的转速为10000 r·min-1，离心的时间为10 min。 如权利要求1-6任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（1）所述提取剂为10%三氯乙酸水溶液与乙腈的混合溶液；优选两者的体积比例为10%三氯乙酸水溶液：乙腈=（15～25）：（75～85）；更优选两者的体积比例为10%三氯乙酸水溶液：乙腈=20：80。 如权利要求1-7任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（1）所述在第一次离心分离后得到上清液的同时得到沉淀，对沉淀进行再次提取，得到上清液与第一次离心分离得到的上清液进行合并，将合并后的上清液进行下一步骤的氮气吹干。 如权利要求1-8任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（2）的甲酸水溶液的质量浓度为0.04％-0.07％，优选质量浓度为0.05％。 如权利要求1-9任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（2）所述色谱条件：色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18柱；流动相为甲醇和甲酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱；流速为0.25 mL·min-1；柱温为30℃。 质谱条件：电喷雾离子源(ESI+)；毛细管电压为3.5 KV；锥孔电压为3.0 V；RF透镜电压为0.5 V；源温为110℃；脱溶剂温度为350℃；脱溶剂气流速度为650L·h-1；锥孔反吹气流速度为50L·h-1。 说 明 书 一种兽药残留的检测方法 技术领域 本发明涉及以一种检测方法，特别是涉及一种兽药残留的检测方法。 背景技术 兽药在防治动物疾病、提高生产效率、改善畜产品质量等方面起着十分重要的作用。然而，由于养殖人员对科学知识的缺乏以及一味地追求经济利益，致使滥用兽药现象在当前畜牧业中普遍存在。 随着人们对动物源食品由需求型向质量型的转变，动物源食品中的兽药残留已逐