单克隆抗体-公开课.ppt

章小寅 2016-5-19 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 使用的酶 诱导方法 主要用途 细胞膜的流动性植物细胞全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理法 （离心、振动、电激） 化学法（PEG） 物理、化学法 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较 二、单克隆抗体 1.抗体是由何种细胞产生的？ 效应B细胞（浆细胞） 2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？ 每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 3.一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？ 动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上 出现在抗原分子表面、决定抗原特异性的特殊化学基团. 抗体的传统生产方法 抗原 反复注射动物 从动物的血清中分离抗体 该法制备抗体的缺点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 2.1单克隆抗体的概念 单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体 提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。 2.2 单克隆抗体的制备 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞 米尔斯坦（阿根廷）和柯勒（德国） 【1984年获得诺贝尔奖】 阅读课本P53-54及识图2-24思考下列问题 2.2 单克隆抗体制备过程 2.2 单克隆抗体制备过程 ①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？ ② 会有几种融合方式？ 免疫处理，获得产生相应抗体的B细胞 BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） 2.2 单克隆抗体制备过程 ③ 杂交瘤细胞是如何筛选出来的？ ④ 如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？ 一选：选择性培养基： 只有杂交瘤细胞才能存活 二选： 克隆化培养和专一抗体检验 体外培养 小鼠腹腔内培养 选出能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 D途径 S途径 D途径 DNA合成 氨基蝶呤 一选：选择性培养基筛选杂交瘤细胞 骨髓瘤细胞 杂交细胞 诱导细胞融合 杂交瘤细胞 筛选 杂交瘤细胞群 单克隆抗体 体内或体外培养 提取 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 注射抗原 经过免疫的B淋巴细胞 免疫 单克隆抗体的制备过程 特点：既能大量繁殖又能产生专一抗体 特点：特异性强、灵敏度高、可大量制备 特异性杂交瘤细胞 克隆化培养 专一抗体检验 筛选 肿瘤细胞增增殖方式和产物是 A．无丝分裂和逆转录抗体 B．减数分裂和转基因抗体 C．有丝分裂和单克隆抗体 D．减数分裂和单克隆抗体 根据已学的知识，能否利用其它方法获得单克隆抗体？ 英国科学家斯勒和米尔坦斯,将B淋巴细胞产生抗体的基因转移到肿瘤细胞内,成功获得世界上第二株能稳定分泌单一抗体的杂交瘤细胞株。 2.3 单克隆抗体的应用 两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 －－灭活病毒 一个新细胞－－杂交瘤细胞 一个优势－－单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势 单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。 1、诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 2、定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 甲胎蛋白(AFP)是一种特异性较强的肿瘤标志物，用甲胎蛋白作为抗原免疫小鼠，制备抗AFP单克隆抗体，并与含有放射性同位素的标记物连接，单克隆抗体携带放射性标记物通过全身血液渗透到所有组织。由于肿瘤细胞表面的AFP会和单克隆抗体特异性结合，所以放射性同位素标记物就不断积累在肿瘤上。通过一定的显影技术就可以发现肿瘤所在的位置。 “生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物 3、治疗疾病和运载药物 主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。 单抗导向，药物为弹头 【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细