第5章 致病菌的检验10——螺旋体、霉形体、立克次体及衣原体.ppt

一、生物学特性 １．革兰氏阴性，圆形或椭圆形 ２．含DNA和RNA两种核酸 ３．有由肽聚糖组成的细胞壁 ４．细胞内寄生（鸡胚或细胞培养、动物接种） ５．独特的发育周期，以二分裂方式繁殖 ６．对某些抗生素敏感 独特的发育周期：两种颗粒结构 原体（EB）： 小而致密，成熟型， 高度易感性； 2. 网状体（RB）： 大而疏松，繁殖型， 不具感染性。 包涵体（inclusion)：是衣原体在细胞空泡内繁殖过程中所形成的集团形态，内含无数子代原体和正在分裂的网状体。 成熟的包涵体经姬姆萨染色呈深紫色，革兰氏阴性。只有沙眼衣原体的包涵体内含糖原，碘液染色时阴性，显深褐色。 沙眼衣原体 二、分类 衣原体属 亲衣原体属 较重要的衣原体有以下4种： 沙眼衣原体：人的沙眼 肺炎亲衣原体：人的急性呼吸道疾病 鹦鹉热亲衣原体：畜禽肺炎、关节炎、流产，也可引起人的肺炎 牛羊亲衣原体：牛羊关节炎、脑脊髓炎、腹泻 三、培养特点 专性寄生，可在鸡胚、小鼠和细胞中繁殖，衣原体的培养只能用以下三种方法： （1）鸡胚或鸭胚培养 （2）动物接种 （3）细胞培养 四、抗原结构 1、属特异抗原——脂多糖； 2、种特异抗原——外膜蛋白OMP； 3、型特异抗原——外膜蛋白抗原的氨基酸可变区 五、抵抗力 　 1、对热敏感； 　 2、对消毒剂敏感； 　 3、耐低温； 　4、抗生素（青、金、红、四、氯、多粘）敏感 六、致病性与免疫性 1、致病机制 　（1）内毒素样物质可抑制细胞代谢，破坏细胞 　（2）外膜蛋白与吸附、侵入及阻止吞噬体和溶酶体融合有关 　（3）可引起Ⅳ型超敏反应 2、沙眼衣原体和肺炎衣原体 　主要感染人，引起人类的沙眼、包涵体结膜炎、泌尿生殖道感染（非淋菌性尿道炎、宫颈炎等）、淋巴肉芽肿、肺炎等；对动物不致病。 肺炎衣原体 沙眼衣原体 3、与畜禽疾病有关的是鹦鹉热和兽类两种衣原体。 （1）鹦鹉热衣原体：主要感染动物，有时也致人类疾病。 　 ① 鹦鹉类的鹦鹉热；非鹦鹉类（鸽、火鸡、鸭、鸡）的鸟疫与鹦鹉热基本同种。鸽感染后表现为结膜炎、鼻炎和腹泻等症状；雏鸡感染后表现为白痢样腹泻、厌食。 ②羊、牛：主要引起流产、早产、死产以及肺炎。 　③猪：肺炎，腹泻，关节炎和结膜炎等，孕猪流产，死产和传染性不育症。 　④人类：主要经吸入患病鹦鹉类的含菌分泌物感染，引起肺炎和毒血症，称为鹦鹉热或鸟疫（又称饲鸟病）。 （2）兽类衣原体 　主要从绵羊和牛中分离；可引起羊牛的多发性关节炎、脑脊髓炎和腹泻。 4、免疫性：抗体持续时间短， 免疫力不强，易造成持续感染和反复感染。 七、微生物学诊断 １ 分离培养 (1) 人工培养基不生长; (2) 在感染细胞胞浆内可见各发育阶段：主要为原体，也可见始体；革兰氏染色阴性； (3) 碘染色反应阴性； (4) 磺胺嘧啶钠抗性: 鸡胚卵黄囊内生长不被磺胺嘧啶钠抑制； ２ 血清学试验 用已知Ag检测未知Ab，采用补体结合试验、琼扩、ELISA等检查属共同抗原与种别抗原。 复习思考题 1. 螺旋体、支原体、立克次体的主要生物学特性。 2. 衣原体独特的发育周期。 * 1.镀银法染色 （1）清洗玻片 选择光滑无裂痕的玻片，最好选用新的。为了避免玻片相互重叠，应将玻片插在专用金属架上，然后将玻片置洗衣粉过滤液中（洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾干，再放入浓洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将水沥干后，放入95%乙醇中脱水。 （2）菌液的制备及制片：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染色前应将待染细菌在新配制的半固体牛肉膏蛋白胨培养基斜面上（培养基表面湿润，斜面基部含有冷凝水）。用消过毒的盖玻片切取培养基边缘的小块琼脂放进试管中，注意要轻放并轻轻摇动，将该试管放在37℃恒温箱中静置10min（放置时间不宜太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松展开。然后，吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端，立即将玻片倾斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。涂片放空气中自然干燥。要注意的是菌液的含菌数量一定要少! 干燥后的处理 (1) 干燥后用稀盐酸或稀氢氧化钠滴,并立即倾斜玻片,使酸(碱)液流下,并自然干燥. (2) 用冲稀的头发顶型剂滴加,处理一到三分钟(具体的要实验才能知道),并自然干燥. 用于鞭毛染色的菌体是用半固体培养基才用支点法培养的。方法是将0.3-0.4%的琼脂肉膏培养基熔化后倒入无菌平皿中，在培养皿中间放三块成分减半（但是NaCl不减半,琼脂为正常百分比）的，恒温培养