第5章 致病菌的检验8——革兰氏阳性产芽孢杆菌(简要).ppt

本菌能由消化道或创伤侵入机体内，引起人类和动物的多种疾病，其中最重要的是气性坏疽。根据细菌产生外毒素的种类差别，可将产气荚膜梭菌分成A、B、C、D、E、F 6个型。 A型：人气性坏疽和食物中毒； B型：羔羊痢疾； C型：绵羊猝死，人坏死性肠炎 D型：牛肠毒血症； E型：犊牛、羔羊肠毒血症。 (1) 直接涂片镜检：G+大杆菌，并有荚膜; (2) 分离培养：接种血平板，有双层溶血环; (3) 纯培养：引起牛奶暴烈发酵; (4) 动物试验：小鼠、家兔或鸽，出现“泡沫肝”; (5) 肠毒素检查：取回肠内容物，加适量灭菌生理盐水稀释，经离心沉淀后取上清液分成两份，一份不加热，一份加热，分别静脉注射家兔或小鼠。如有毒素存在，不加热组动物常于数分钟至数小时内死亡，而加热组动物不死亡。 5、微生物学诊断 二 破伤风梭菌（Cl.tetani） 破伤风梭菌大量存在于人和动物肠道中，由粪便污染土壤，是引起人畜破伤风的病原,经伤口感染引起疾病。 具有芽孢，其芽孢广泛存在于各类土壤中。本病以骨骼肌发生强直性痉挛的症状为特征，此菌也称为强直梭菌。 破伤风梭菌菌体细长，长4-8μm，宽0.3-0.5μm ，周身鞭毛，芽胞呈圆形，在动物体内外均能形成，位于菌体顶端，直径比菌体宽大，似鼓槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性，形成芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。 1、形态学特性 2、培养特性 破伤风梭菌专性厌氧，最适生长温度为37℃pH7.0～7.5； 普通琼脂平板：24-48h形成直径1mm 以上的不规则菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状，易在培养基表面迁徒扩散; 血液琼脂平板：明显溶血环； 疱肉培养基：肉汤浑浊，肉渣部分被消化，微变黑，产生气体，生成甲基硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。 3、生化特性与抵抗力 生化特性 　 一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。 抵抗力 　 本菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似，但芽胞抵抗力强大。在土壤中可存活数十年，能耐煮沸40-50min。对青霉素敏感，磺胺类有抑菌作用。 破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中；自然条件下，其易感性为：马＞猪、牛、羊、犬，人也易感，禽类及变温动物不易感。此菌产生两种毒素 破伤风痉挛毒素：引起神经兴奋性异常增高和骨骼肌痉挛。是一种神经毒素，为蛋白质，由十余种氨基酸组成，不耐热，分子量15万，可被肠道蛋白酶破坏，故口服毒素不起作用。破伤风毒素的毒性非常强烈，仅次于肉毒毒素。 破伤风溶血素：不耐热，对氧敏感，可溶解马及家兔的红细胞，与致病性无关。 4、致病性 5、微生物学诊断 破伤风梭菌分布广泛，如果病人或病畜无临床症状，即使伤口找到破伤风梭菌也不能作为诊断的依据。故破伤风的诊断主要根据有无创伤病史和临床症状，一般不需要作微生物检验，仅在必要时才进行检验。 取创伤渗出物或坏死组织镜检，或加热80℃经20min以杀死无芽胞杂菌，接种血液琼脂培养基或疱肉培养基中，在厌氧条件下培养24-48小时，挑选可疑菌落进行鉴定，也可取培养滤液0.1毫升接种小白鼠，作毒力和毒力保护试验。 破伤风一旦发病，治疗困难，应以预防为主。 　（1）紧急预防：如遇严重污染创伤者，除用类毒素加强免疫外，可再注射破伤风抗毒素（Tetanus antitoxin,TAT）。即在一臂注射抗毒素，另一臂注射类毒素，6-12周后再注射类毒素。 　（2）特异治疗：一旦发现病人或病畜，应立即注射破伤风抗毒素，要早期足量，每次可肌肉或静脉注射6-10万单位，注射前必须作皮肤试验，防止抗毒素血清过敏性休克的发生。 　（3）大剂量的青毒素（或四环毒）能有效地抑制破伤风梭菌在局部病灶中繁殖，并且对混合感染的其他细菌也有作用，故亦可用于治疗。 　（4）若已确诊为破伤风时，应及时采取给予适当的镇静剂和肌肉解痉剂等措施，以预防因呼吸肌痉挛而窒息死亡。 6、免疫防治 复习思考题 1.炭疽杆菌的主要培养特性有哪些？如何进行炭疽病的微生物学诊断？ 2.产气荚膜梭菌的生化特点及其微生物学诊断。 3.破伤风梭菌的主要生物学特性。 4.名词解释：串珠反应，Ascoli反应，暴烈发酵 * 常成为实验室的污染菌。 * 毒素的产生受基因控制，失去毒素基因不能产生。本菌本身可能堵塞毛细血管，使组织微循环内血栓形成。 * 云南宝山县1976年8月，某农民前往1965 年曾流行过绵羊炭疽的草原驮肥料，每天驮一次，往返8次。末次途中，一骡发病，随即死亡，农民们立即将死骡抬至河边剖剥，并将肉分给其他人食用，在剖剥处把骡血及粪便洒在地面，并用河水洗骡肉及工具，使环境和河水遭到严重污染。河水经过的12个生产队，先后发生炭疽爆发，发生人皮肤炭疽20例，家畜患炭疽计175头