Su11248对人重组P450同工酶的体外抑制实验研究.docVIP

Su11248对人重组P450同工酶的体外抑制实验研究 　　摘要：目的 通过体外实验探讨SU-11248对CYP3A4、CYP2C9和CYP2D6酶活性的影响， 为其在临床与其他药物的联合应用提供实验依据和理论指导。方法 采用BD公司的人重组P450酶抑制剂筛选试剂盒，测定Su11248对上述三种P450同工酶的体外活性抑制50%的药物浓度（IC50）。结果 SU-11248对CYP3A4的IC50=11.85μM，对CYP2C9的IC50=7.74μM，对CYP2D6的IC5050μM。结论 Su11248对CYP2C9酶活性有中等程度的抑制作用，对CYP3A4和CYP2D6酶活性无明显抑制作用。 　　关键词：Su11248；重组酶；细胞色素P450同工酶；药物-药物相互作用 　　Su11248是一种新型多靶向性的治疗肿瘤的口服药物，能选择性地靶向某些蛋白的受体，临床上主要用于治疗晚期肾细胞癌、肺癌和脑膜瘤等，是目前肿瘤化疗研究的热点药物之一[1～3]。本实验利用人重组CYP450酶，在体外水平上研究Su11258对CYP3A4、CYP2C9和CYP2D6活性的影响，为Su11248在临床应用中可能出现的药物-药物相互作用提供实验依据和理论指导。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 Su11248（购自biocompound公司），用二甲亚砜（DMSO）溶解， -20℃避光保存备用。人重组CYP3A4、CYP2C9和CYP2D6酶抑制剂筛选试剂盒（购自BD公司），-80℃避光保存备用。BioTek检测系统（SYNERCYTM4）。 　　1.2方法 　　1.2.1酶促反应体系 反应体系由NADPH 发生系统（NADP+、 Glucose-6-Phosphate、 Magnesium Chloride Hexahydrate）、KPO4（pH 7.4）、Tris （pH 7.5）、阳性对照和底物组成。CYP3A4的底物为7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素（7-Benzyloxy-4-trifluoromethylcoumarin ，BFC），CYP2C9的底物为3H-1，2-二氢-2-（4-甲基苯胺基）甲基-1-吡咯里嗪酮（3H-1，2-dihydro-2-（4-methyl-phenylamino） methyl-1-pyrrolizinone ，SFZ），CYP2D6的底物为3-[2-（N，N-二乙基-N-甲氨基）乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素（3-[2-（N，N-diethyl-N-methylamino）ethyl]-7-methoxy-4-methylcoumarin，AMMC）右美沙芬。三种酶的阳性化合物分别为酮康唑（CYP3A4）、磺胺苯吡唑（CYP2C9）和奎尼丁（CYP2D6）。Su11248的实验浓度最大值为50μM，按照3：1浓度稀释得到8个浓度组，分别为50μM、16.67μM、5.56μM、1.85μM、0.62μM、0.21μM、0.07μM和0.02μM，每个浓度设置3复孔。 　　1.2.2 IC50值测定：按照BD公司的人重组P450酶抑制剂筛选试剂盒说明书操作。其中，CYP3A4和CYP2C9的检测波长为（400nm/528nm），CYP2D6 的检测波长为400nm/460nm。根据酶标仪检测得到数据计算相应抑制率，抑制率=（受试孔值-空白孔值）/（对照孔值-空白孔值），最后利用Graphpad Prism计算IC50值。 　　1.3结果评价 根据IC50值，判断Su11248对相关重组酶的影响。当IC50 10 μM时，抑制作用较弱，1 μM IC50 10 μM 属于中等程度抑制；IC50 1 μM 时，抑制作用较强。 　　2结果 　　2.1 Su11248对CYP3A4活性的影响：酮康唑（ketoconazole）对CYP3A4有显著抑制作用且抑制作用随药物浓度的增加而增强，说明利用该实验体系进行CYP3A4活性抑制实验方法可行。Su11248对CYP3A4活性抑制的IC50=11.85μM，IC50 10 μM，说明Su11248仅能较弱地抑制CYP2C9酶活性。 　　Fig.1 Su1248 对CYP3A4的体外抑制作用 　　（A）酮康唑（ketoconazole）（B）Su11248 　　2.2 Su11248对CYP2C9活性的影响：磺胺苯吡唑（sulfaphenazolum）对CYP2C9有显著抑制作用且抑制作用随药物浓度的增加而增强，说明利用该实验体系进行CYP2C9活性抑制实验方法可行。Su11248对CYP2C9活性抑制的IC50=7.74μM，其1 μM IC50 10 μM ，说明Su11248能够中等程度地抑制CYP2C9酶