一种新型的儿茶酚―O位―甲基转移酶抑制剂对帕金森大鼠结肠动力及离子转运的影响.docVIP

一种新型的儿茶酚―O位―甲基转移酶抑制剂对帕金森大鼠结肠动力及离子转运的影响 　　摘要：目的 研究一种新型的儿茶酚-O位-甲基转移酶抑制剂对帕金森病大鼠远端结肠平滑肌动力及上皮离子转运的影响，探讨其引起腹泻、便秘、腹痛等胃肠道副作用的可能机理。方法 利用离体帕金森病模型大鼠结肠平滑肌和粘膜标本，采用胃肠道平滑肌动力记录技术、短路电流测定技术测定平滑肌的收缩舒张以及粘膜上皮的离子转运。结果 发现新型抑制剂恩他卡朋对正常大鼠的平滑肌没有作用，但对帕金森病大鼠纵行肌的收缩具有抑制效应，并呈现剂量依赖性的特征，而对环形肌则没有明显的影响。在正常鼠和帕金森病模型大鼠结肠粘膜的基底侧加入恩他卡朋（250？滋M），引起的短路电流（ISC）分别为52.82± 5.86 ？滋A/cm2和 37.69 ± 8.91？滋A/cm2，帕金森模型组和正常组相比，均值降低；在结肠粘膜的基底侧加入恩他卡朋（250？滋M），正常大鼠和模型大鼠的跨膜电阻分别为：46.29 ± 3.949 Ω?cm2 和 49.10 ± 6.385 Ω?cm2 。模型大鼠和正常组相比，跨膜电阻均值略有增加，但无统计学差异。结论 新型抑制剂恩他卡朋对帕金森病大鼠纵行肌的收缩呈现剂量依赖性的抑制效应，并且可以引起帕金森病大鼠远端结肠上皮跨膜短路电流的降低。这些变化可能是造成服用恩他卡朋的患者产生腹泻、便秘等胃肠道副作用的可能机理之一。 　　关键词：新型的儿茶酚-O位；甲基转移酶抑制剂；帕金森病 　　左旋多巴是治疗帕金森病最有效的药物，但帕金森患者应用其治疗3～5年后，多数患者出现诸如疗效减退及并发症[1，2]，恩他卡朋是克服这些问题的新药，是一种治疗帕金森病有效的儿茶酚-O位-甲基转移酶（COMT）抑制剂，但应用恩他卡朋后患者会出现明显的胃肠道副作用，特别是腹泻，或者有些则表现为便秘、腹痛，恩他卡朋引起胃肠道不良反应的确切机制尚不明确[3～5]。 　　我们推测恩他卡朋之所以引起帕金森病患者胃肠道不良反应，可能与其影响了肠道平滑肌动力变化，甚或影响了肠道上皮的相关离子转运有关，恩他卡朋影响帕金森病患者肠道上皮以及平滑肌动力改变的机制未有文献报道。基于此种情形，本实验观察了恩他卡朋对帕金森病模型大鼠离体结肠平滑肌的作用，以及其对大鼠远端结肠上皮离子转运影响，探究其造成帕金森病患者应用恩他卡朋造成肠道不良反应的主要原因，对预防和应对这些副作用提供实验依据。 　　1资料与方法 　　1.1 实验动物 SPF级雄性SD大鼠，体重200～300g，随机分组，按照实验动物福利委员会许可，动物在室温条件下，正常昼夜更替的光照，24h食水供应，直至试验之日。动物来源于首都医科大学动物科学部，国家等级动物饲养场。 　　1.2 主要试剂和配制 恩他卡朋为芬兰公司产品（Orion Corporation），所有化学试剂均溶于二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO），且DMSO的体积分数不超过0.1%。预实验表明，溶剂不改变基本的电生理参数。 　　1.3 大鼠结肠平滑肌收缩的记录 大鼠断颈处死后，切开腹部，快速取邻近肛门7cm长的远端结肠，用Kreb，s冲洗肠内容物，取远端结肠第一段到第四段（DC1-DC4），每一段沿肠系膜剪开，腔面膜朝下平铺于硅胶上，周围有冰冷的Kreb，s保持组织活性。全层的结肠沿纵行肌或环形肌剪成 2 mm宽，1～1.5 cm长的肌条，用外科缝线在肌条的两端各缝扎一细线，一端固定在标本支持棒上，另一端挂于压力传感器。肌条置于盛有恒温（37 ± 0.5℃）、持续通气（95%氧气与5%二氧化碳）10 mL的Krebs里内。给肌条施加1g的静息张力，肌条长度的改变被张力传感器所记录，肌条在水浴中适应120min后，正式记录自发收缩的频率以及幅度。 　　1.4 用于测量短路电流的组织制备 大鼠远端结肠粘膜标本制备：用颈椎脱臼法处死大鼠，打开腹腔，迅速从直肠淋巴结向上取约7cm远端结肠（该淋巴结通常位于直肠向上约3 cm处）。用顶端精细的镊子，在解剖显微镜下，小心将粘膜下层?肌层和浆膜层与粘膜层钝性分离，得到一薄层组织，包括上皮层和一些粘连的结缔组织，大鼠远端结肠粘膜标本即制备完成。 　　1.5 短路电流测定技术 本实验采用恒温灌流装置体外测量短路电流，将结肠粘膜标本置于灌流装置的Ussing小室中。在结肠粘膜的两侧注入5 ml K-HS，同时通入95%的氧和5%的二氧化碳，使溶液的pH维持在7.4左右，置于37℃水浴中30min，使其电参数达到稳定。用电压钳将上皮固定在零电位，使组织短路，此时测得跨上皮电流为短路电流。 　　1.6 大鼠PD模型的制作 选取雄性SD大鼠，体重210～240 g。首先称量体重，并按每100 g体重0.4 ml注射1