江西省血液中心核酸检测经验介绍课件.ppt

核酸检测实验室检测管理 严格单向工作流向制度 进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即：试剂贮存和准备区→标本制备→PCR扩增→产物分析； 各区在物理空间上完全互相独立，使用功能上互相分割； 各区之间不能有空气直接相通。 严格物品专用制度 各区使用的仪器设备、移液器、Tip、试管架、笔记本、记号笔、手套等包括清洁用物品都必需执行专区专用原则。 各工作区域用品必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。 分区内操作流程的合理化 了解实验室污染的来源，可能产生污染的实验操作（如阳性样本、实验过程中每一次的开盖过程等） 操作顺序应尽量从相对清洁到相对污染（如混样区相对清洁度：检测耗材标本阳性质控品),操作顺序颠倒时应及时更换手套或进行相应的处理； 养成良好的实验室操作习惯，规范行为。 避免携带污染 操作人员应注意防止通过头发、眼镜等非专用物品将污染物携带到清洁区； 警惕手套可能接触污染物或污染其它物品等。 2010年8月9日--2013年7月31日共完成177916份血液标本的核酸检测。其中拆分检测586次；拆分出390例酶免阴性而NAT阳性的标本，阳性率为0.22%。 鉴别阳性标本190例，其中188例为HBV阳性，另有1例HBV、HCV合并感染,1例HCV阳性。 血站开展核酸检测情况 检测常见现象分析 问题1：初混阳性，拆分阴性标本如何解释？ 因根据检测CT值、扩增曲线等综合判断，一般CT值在37以上可考虑为初混时产生了假阳性反应，因拆分实验所检测的样本量要高于混样，拆分检测可信度高于初混检测，对于拆分实验为阴性的标本可视为合格标本， 问题2：拆分为阳性，鉴别试验阴性，如何解释？ 原因分析：标本病毒含量极低，因此在病毒载量系统上检测无结果；其次，对于极低浓度样本，其取样也存在随机性，不能够保证每次取样都能吸取到含有病毒的部分。 建议：对于拆分检测阳性标本，无论其鉴别试验结果如何，有必要进行血液报废处理。 * 问题：全血和血小板是否采取同一种检测模式？ * * * 江西省血液中心核酸检测经验介绍 钱 榕 主要内容 中心简介 核酸检测实验室的设置及工作流程 核酸检测实验室管理和检测关键控制点 开站核酸检测情况 江西省血液中心概况 江西省血液中心于1984年成立，隶属省卫生厅管理的公共卫生事业单位。占地面积63.4亩，总建筑面积21788㎡,现有职工171人，供应省直13家医疗机构临床用血，2011年总供血量为23.8吨，并承担全省采供血机构质量控制与评价、业务技术指导、人才培训及血液相关的科研等任务。自2006年起，临床用血已实现100%来自于自愿无偿献血。成分输血达到99.8%。? 中心重视科研工作，致力从临床输血治疗和开展新技术治疗的需求出发，开展了血液去除白细胞、血浆病毒灭活等新技术。2010年4月份，中心与北京、上海、广州等12个省市15所采供血机构一道，被卫生部列为我国内地首批核酸检测试点单位。此外，中心先后开展了骨髓移植配血、器官移植配型(基因法)、产前血型血清学检测、新生儿溶血病检测、亲子鉴定(基因法)等研究工作。 中心核心价值观 忠诚履行输血使命精益服务健康人生 中心环境 标本交接离心区：用于核酸标本的接收、离心处理； 设备：大容量低温离心机2台 混样区：用于血液标本开盖、混样、以及质控品的加样； 设备：全自动混样仪HAMILTON STARIVD 2台、生物安全柜1台、 移动紫外车3台； 提取扩增检测区：用于核酸的提取、PCR扩增和检测。 设备：3套 COBAS? AmpliPrep+COBAS? TaqMan 、服务器1台、试剂暂存冰箱1台、移动紫外车3台 核酸检测实验室的设置 核酸检测实验室的设置 实验室平面图  检测系统： cobas s 201核酸血液筛查系统 设备配置： 2 STAR+ 3CAP+ 3docking+ 3CTM 试剂组成： cobas? TaqScreen MPX Test（96人份，一代） cobas? TaqScreen MPX Control Kit（一代：6*6） cobas? TaqScreen Wash Reagent 全血标本 标本采集后4小时内进行离心处理。样本离心后先进行常规酶免检测，然后将酶免试剂阴性结果标本进行六混样核酸检测。如混样检测有反应性，再进行拆分检测。 机采标本 标本采集后4小时内进行离心处理； 加样模式：六混样（1机采标本+5全血标本） 核酸检测实验室工作流程 核酸检测（酶免第一批阴性） 23.00 08.00 09.00 10.00