外周血细胞形态检验课件.ppt

外周血细胞形态检验 赣州市妇幼保健院 丁克文 ● 外周血细胞检验程序 涂片、染色与镜检；外周血细胞形态检验报告方式● 外周血红细胞异常形态检验 大小、形态、染色与结构异常；点彩红细胞● 外周血白细胞异常形态检验 中性粒细胞异常变化；异常淋巴细胞● 血小板形态与寄生虫检验 血小板大小、形态、数量变化；寄生虫 外周血细胞检验程序 血涂片的制备 ● 器材 清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片。 ● 操作 在玻片近一端1/3处，加一滴血液，握住另一张边缘光滑的推片，以30o~45o角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至载玻片的另一端。 ● 注意事项 ★血膜呈舌状，头、体、尾分明 ★空气中晃动，尽快干燥；37℃恒温箱中促干 ★涂片的厚薄、长度与血滴大小（10~20μl）与血片质量 ★1h内染色或在1h内甲醇固定 ★正确清洁玻片 ★抗凝血或毛细血管血涂片；EDTA能阻止PLT聚集 ★抗凝血液4h内涂片 血涂片染色 ● 原理 瑞氏（Wright）染色法（经典染色法） 瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理 吸附作用。 ● 试剂 ★瑞氏染液 瑞氏染料 0.1 g 甲醇 （AR） 60ml ★pH6.8磷酸盐缓冲液（pH6.4~6.8） 磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.3g 磷酸氢二钠（Na2HPO4） 0.2g 加少量蒸馏水溶解，再加至1000ml。 ● 操作 ★加瑞氏染液数滴，固定血膜约1min。 ★滴加约等量的缓冲液与染液混合， ★室温下染色5~10min。 ★用流水冲去染液,待干燥后镜检。 ● 注意事项 ★PH对细胞染色有影响。 ★未干透的血膜不能染色。 ★染色时间与染液浓度、染色时温度成反比。 ★不能先倒掉染液，用流水冲去。 ★血膜上有染料颗粒沉积，可加少许甲醇。 ★先在低倍镜下浏览全片，了解染色好坏和 细胞分布情况，观察有无异常细胞。 ★选择涂片体尾交界处染色良好的区域，在 油镜下计数100个白细胞，按其形态特征 进行分类计数。求出各类细胞所占百分数。 ● 注意事项 ★分类时应从血膜体尾交界处边缘向中央依次上下呈城垛状迂回移动，计数使不能重复和遗漏。 ★白细胞数明显减少的血片，应检查多张血片。 ★分类见有核红细胞，不计入100个白细胞内，以分类100个白细胞过程中见到多少有核红细胞报告，并注明所属阶段。 ★除慢淋外，破碎细胞或不能识别细胞不超过白细胞总数的2%。若破碎细胞仍能明确鉴别，如破碎的嗜酸性粒细胞，应包括在分类计数中。在结果报告中应对破碎细胞或不能识别细胞作适当描述。 ★分类中应注意观察成熟红细胞、血小板的形态、染色及分布情况，注意有无寄生虫和其他异常所见。 ★白细胞形态变化较大，遇有疑问应请示上级主管或主任进行核实，以减少错误。 异常红细胞形态检查 大小异常 正常红细胞大小较为一致，直径6~9um 在各种贫血时，红细胞可出现大、小不 一。直径10um为大红细胞，15um为 巨红细胞，常见于巨幼贫、肝脏疾病等， 直径6um为小红细胞，多见于缺铁性贫 血等。 直径相差1倍以上为大小不均 右图：大红细胞（上） 小红细胞（下） (中央苍白区扩大） 形 态 异 常 RBC直径通常6um、厚度2.6 um，呈小圆形，细胞中心区蛋白含量较正常多。见于遗传性球形红细胞增多症（25%以上）、自身免疫性溶贫和异常Hb病（HBS、HBC病等）。 红细胞呈椭圆形，横短，长大，有时呈畸形。正常人可见到， 15%。 见于以下疾病: 1、遗传性椭圆性RBC增多症，高 于 25~50%才有诊断价值。 2、大细胞性贫血时可达25%。 3、其他各类贫血有不同程度的 增多。 比正常红细胞扁薄，中心有少许血红蛋白，部分可与周围的血红蛋白连接，边缘部染色较中央深，故呈靶状。主要见于以下疾病: 1、珠蛋白生成障碍性贫血 2、严重缺铁性贫血 3、一些血红蛋白病（血红蛋白C、D、E、S病） 4、肝病、脾切除后及阻塞性黄疸等。 细胞狭长似镰刀，也可呈麦粒状或冬青叶样，主要见于遗传性镰形红细胞增多症 红细胞淡染区呈裂口状狭孔，正常4%。增多见于以下疾病 : 1、口形红细胞增多症