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* 实验5 双缩脲法测定蛋白质浓度 实验目的 掌握比色法测蛋白质浓度原理及方法 学习标准曲线绘制和分光光度计使用 实验原理 蛋白质肽键结构具有双缩脲反应，所产生的紫色配合物在540nm有最大吸收。在一定能够浓度范围内，蛋白质浓度与双缩脲反应物光吸收度线性相关，可以作为定量分析依据。 实验仪器与试剂 实验器材 玻璃试管1.5cm X15 cm， 10 只 刻度移液管5mLX3， 2mLX1， ？型 紫外-可见分光光度计 实验试剂 双缩脲试剂； 标准溶液贮备液：2mg/mLBSA溶液 待测蛋白液：卵清蛋白液 实验操作： 1. 标准曲线绘制工作表 A540nm 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 蛋白质浓度 (mg/mL) 充分混匀,30 min以内在540nm处测定吸收度. 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 双缩脲试剂 1.2 1.5 1.8 2.1 2.4 2.7 3.0 dH2O 1.8 1.5 1.2 0.9 0.6 0.3 0.0 BSA (2mg/mL) 6 5 4 3 2 1 0 管号 试剂 mL 2. 未知样品测定：取未知蛋白质样品？mL，… … (按照讲义操作，做duplicate） 数据处理： 标准曲线绘制：用坐标纸，以吸光度值对标准蛋白质浓度作图 Y：A540；X：蛋白质浓度(mg/mL), 坐标刻度：涵盖全部测定值，易于读取，适当反应实验精度 比例：适当，基本保证图形为正方形，容易进行数据处理 数据点标示：用X，O 等图形，其中心点为数据值 趋势线回归：常用一元回归方程；直接估计——使实验数据点分布在拟合曲线的两侧， 直线方程拟合：任意选取拟合曲线上两点，求直线方程 未知样品浓度：测定值应在标准曲线范围以内 吸光度值代入方程 稀释倍数 *
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