实验一 微生物学实验须知和基础技术课件.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * 实验技术一 微生物学实验须知与基础技能 一、实验须知 （一）微生物实验室 实验室 基本 条件 光线 明亮 室内 洁净 空气 清新 充足的 电源 抗腐蚀 实验台 橱柜 无菌室条件 准备(缓冲)间 工作间 紫外线杀菌灯 固定的工作台 空气净化装置 ∣ 实验室工作规则 实验前做好充分准备； 穿着消毒过的工作衣 ； 实验室内应当安静，秩序井然; 严格遵守操作规程，防止生物材料被杂菌污染; 每一项实验尽量一次性完成，防止中途间断; 做好实验纪录。 （二）微生物实验室主要仪器 常用的玻璃仪器 盛装有液体试样的玻璃仪器 盛装固体样品的玻璃容器 量取液体试样的玻璃仪器 测量用玻璃仪器 其他用途的玻璃仪器 试管、离心管、比色管、发酵管、三角瓶、烧杯、滴瓶、圆底烧瓶、蒸馏烧瓶、碘量瓶、试剂瓶 表面皿、培养皿、干燥器、秤量瓶 刻度吸管、容量吸管、微量移液器、容量瓶、量筒、量杯 血球计数板、血盖片、载玻片、盖玻片 过滤漏斗、染色缸、玻璃珠、玻璃管、玻璃棒 常用的仪器及设备 接种工具和方法 　　在实验室或工厂实践中，用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 二、基础实验技能 （一）玻璃仪器的清洁方法 新玻璃仪器 用过的玻璃仪器 玻璃仪器 吸管、滴管 带油污器皿 2%NaOH热溶液浸10-15min 水洗 稀HCl洗 水洗 装有强碱或强酸容器 浸于洗液或2%的盐酸数小时 自来水充洗干净 干燥后灭菌备用 清水冲洗 热肥皂水清洁 清水冲数次 蒸馏水冲洗 完后应立即用清水和蒸馏水冲洗即可 用毕立即放入盛有大量水的缸内,用水多次冲,最后蒸馏水洗 洗涤工作注意事项 不应对玻璃器有所损伤； 用过的器皿应立即洗涤； 装有传染性微生物容器，先浸在5%石炭酸或1-3% 次氯酸钠溶液内或蒸煮灭菌后，再洗涤； 盛过有毒物品的器皿,不要与其他器皿放在一起； 难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起； 强酸、碱及挥发性有毒物品，必须倒在废水缸中 （二）洗液的配制和使用 洗液的配制 洗液的作用和使用注意事项 主要作用:将有机物氧化成为能溶解的物质； 注意：洗液有很强的破坏作用 三、健康与安全 （一）实验室工作安全事项 注意着装整齐； 严禁在实验室吸烟、饮食或嬉戏； 小心使用玻璃仪器，远离危险品存放地； 使用化学药品时用量不要超出规定用量； 严防致病微生物泄漏； 严格按实验操作规程进行实验。 （二）实验室意外事故的处理 火险 破伤 火伤 灼伤 食入酸碱或腐蚀性物质 吸入菌液 立即关闭电门、煤气门，使用灭火器、沙土和湿布灭火 除尽外物，蒸馏水洗，涂以碘酒或酒精 涂5%鞣酸、2%苦味酸或苦味酸铵苯甲酸丁脂油膏 酸性药品所致、碱性药品所致灼伤、石炭灼伤 食入酸、碱、石炭酸或苏来 吸入非致病性菌液；吸入葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌等；吸入白喉菌 实验室常用消毒方法 75% 酒精 过氧乙酸 碘伏 84消毒液 肥皂、洗衣粉 实验室常用灭菌方法 火焰灼烧法 干热灭菌法 湿热灭菌法 紫外灭菌（消毒） 过滤除菌法 火焰灼烧法 常用于接种针、接种环、接种铲、接种钩和试管口的灭菌 灭菌 微生物实验的一般流程 常用的接种方法 １）划线接种 这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 　２）三点接种 在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 ３）穿刺接种 在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。 　４）浇混接种 该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 ５）涂布接种 与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速