实验一 蛋白质的定量测定 Lowry法课件.pptVIP

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一、 实验目的 1、 熟悉改良Lowry法测定血清蛋白质含量的原理。 2 、掌握直接比色法和标准曲线法的应用。 3 、熟悉分光光度计的使用。 二、 实验原理 考马斯亮蓝法 Lowry法 紫外分光光度法 二、 实验原理 蛋白质 紫红色蛋白质-铜的络合物 碱性铜试剂 酚试剂 蓝紫色溶液 肽键 酪氨酸、色氨酸等氨基酸残基 直接比色法 标准曲线法 A=KLC 三、 实验步骤 试剂(ml) 1 2 3 4 5 6 测 定 管 标 准 管 空 白 管 标准蛋白溶液 (250μg/ml) - 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 稀释血清1.0 - 0.4 - 0.9% NaCl 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 - 0.6 1.0 碱性铜试剂 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 混匀,37℃ 保温20 分钟 酚试剂 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀,37℃ 保温30分钟 四、 结果与分析 血清蛋白质含量的计算 标准曲线法:绘制标准曲线,根据标准曲线求得血清 中蛋白质的含量 直接比色法:根据标准管吸光度值计算血清中蛋白质 的含量 * 溶液 * * 溶液 *

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