实验一、培养基制备与消毒灭菌课件.ppt

实验一、培养基制备与消毒灭菌 实验目的及要求 了解培养基配制原理，学习并掌握培养基制备方法。 了解消毒与灭菌应用范围及基本原理，学习并掌握实验室常用消毒与灭菌方法。 学习一些微生物的实验准备工作。 实验原理 培养基的制备 培养基：满足微生物生长的营养需要，人工配制的混合营养基质。 用途：用于微生物的分离、培养、增殖、保藏及鉴定。 牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养） 马铃薯糖培养基（常用于培养真菌） 高氏一号培养基（用于培养放线菌） 配制原则 根据营养不同配制不同培养基 注意各种营养物质的浓度及配比 调节适宜的pH值 考虑加生长因子 培养基应物美价廉 灭菌处理 消毒与灭菌 消毒：应用理化方法杀灭部分微生物（主要是病 原微生物）。 灭菌：应用理化方法杀灭物体上所有微生物。 类型 一、加热高温灭菌 1.干热灭菌 ▲火焰烧灼灭菌 ▲热空气灭菌 2.湿热灭菌 ▲常压蒸汽灭菌 ▲高压蒸汽灭菌 ▲煮沸法灭菌 ▲超高温灭菌 二、紫外线灭菌 三、过滤灭菌 四、化学药剂的消毒与灭菌 一.高温灭菌：利用高温使菌体蛋白和核酸变性而失去活力以达到杀菌的目的。 二.紫外线灭菌：诱发菌体核酸结构变异，及使空气中氧电离、水氧化而产生杀菌化学物质以杀灭杂菌。 三.过滤除菌：将处理的含菌液体或气体通过细菌过滤器，使杂菌被机械截留从而达到除菌。 四.化学药剂的消毒和灭菌：杀菌剂（破坏微生物的代谢机能并有致死作用）；消毒剂；防腐剂（抑制微生物的生长繁殖）。 干热灭菌的操作 包扎。 装箱（物品不可与灭菌箱内壁接触，且不可摆放过挤） 灭菌（启动开关，并打开排气孔，待温度升至80℃-100℃关闭排气孔，继续升温至160℃-170 ℃计时，恒温2小时） 降温，取物（关闭电源，自然降温到60度开箱取物） 高压蒸汽灭菌的操作 灭菌前准备（在锅内加适量水）。 装放物品（不要过挤，且容器口端不要与物品接触） 加热放气（打开放气阀，待有大量水汽排出，维持3—5分钟，锅内空气排尽，关上放气阀） 升温保压（温度，压力升至灭菌所需时计时，压力1.05Kg/cm2,121.3 ℃ ，20—30分钟） 出锅（关闭电源，待指针回零，打开放气阀，稍等一些时间，再取物） 实验报告 （1） 培养微生物的培养基应具备哪些条件？ （2） 为什么培养基配制好后必须立即灭菌？ （3） 在培养基中，琼脂有何作用？它有哪些特性？ （4） 使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时应注意哪些事项？ （5） 比较干热灭菌与高压蒸汽灭菌的异同。 * * 培养基 1 根据化学组成分类 完全用天然物质或其浸出汁配制。成分不确定。 如肉汁、豆芽汁、牛乳、土豆汁是天然营养原料。 酸奶、饮料酒、腐乳、酱类的发酵生产。 优点：配制方便，成本较低，营养丰富。生产上用 缺点：成分不确定。 （1）天然培养基： 培养基 培养基分类： （2）合成培养基 全由化学成分已知的物质配制的培养基。成分确定。 如：高氏培养基、察氏培养基。 优点：成分确定，重复性强，宜于科学研究 如菌种选育，遗传分析。实验室用。 缺点：费用较高。 培养基 （3）半合成培养基 由部分天然物质和一些成份已知的化学药品 配制而成。 如：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 优点：营养成分更全面、均衡。 实验室、发酵业用得最多。 培养基 2 根据物理状态分类 （1） 固体培养基 概念：在液体培养基中加入凝固剂——琼脂、明 胶、硅胶等。常用的是琼脂（洋菜）。琼 脂加入量1.5～2.0％。 ▼成分为多缩半乳糖 ▼绝大多数微生物不能利用 ▼融化温度96℃ ，凝固温度45℃ ▼对微生物无毒性 固体培养基作用 培养菌落进行分离、鉴定、计数、保藏 琼脂的特性： 培养基 （2）半固体培养基 （3）液体培养基 加入凝固剂。琼脂加入量0.2～0.5% 作用：观察细菌的运动状况。 不加凝固剂 用于发酵业。液体培养。 培养基 （1）基础培养基 概念：含有微生物生长繁殖所需的基本营养物质。 用于普通微生物培养。 细菌通用培养基——牛肉膏蛋白胨培养基。 真菌通用培养基——马铃薯蔗糖培养基。 培养基 3 按用途差异分类 （2）加富培养基 在普通培养基中加入某些特殊物质或某些生长素，只适于一种或一类微生物的生长。 （3）选择培养基 根据培养微生物的生理特性配制。可促进某种微生物生长，抑制某类微生物生长。 如：加青霉素的培养基，分离霉菌和酵母菌。 加1%酚——分离放线菌 特点：某种微生物富集逐渐淘汰其它各种微生物。 培养基 （4）鉴别培养基 特点：●确保所培养的微生物有丰富的营