实验五_过氧化物酶酶活性的测定课件.ppt

植物组织中过氧化物酶活性的测定 ——愈创木酚比色法 一、实验目的 熟悉测定过氧化物酶活性的常用方法及其测定原理。 过氧化物酶（POD) 过氧化物酶广泛存在于植物体中，是活性较高的一种酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度。 此外，过氧化物同工酶在遗传育种中的重要作用也正在受到重视。 二、实验原理 RH2+ H2O2→2H2O + R 在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使邻甲氧基苯酚（愈创木酚）氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 处的吸光度变化速率来测定过氧化物酶活性。 三、实验材料 菠菜、油菜、树叶、草、  四、仪器用品与试剂 分光光度计，研钵，移液管，吸管 愈创木酚，30％过氧化氢，磷酸缓冲液 五、实验步骤 1、称取植物材料 0.5g ，剪碎，放入研钵中，加入 1 ml 磷酸缓冲液（ 0.05mol/L）研磨成匀浆，以 12000 rpm 离心 15 min ，上清液即为粗酶液。 试剂 0 1 2 3 0.01mol/L磷酸缓冲液，ml 0.02mol/L 愈创木酚，ml 酶液，ml 2.92 0.05 0 2.9 0.05 0.02 2.9 0.05 0.02 2.9 0.05 0.02 加好反应物，摇匀，立即加新配制的H2O2 (0.01 ml)，即刻摇匀并计时，每隔 30s 读数1次，共计6个数值。 对照管 测定管 六、实验结果 式中： ΔA470 —— 反应时间内OD变化值 W???—— 植物鲜重（g） t??? —— 反应时间（min） 过氧化物酶活力 = ΔA470 W×0.01 × t 用每min OD值变化0.01作为1个过氧化物酶活性单位（U）表示 七、思考题 说明植物过氧化物酶在植物代谢中的意义。