实验四 微生物的染色课件.ppt

实验八 水中大肠菌群的检测 目的 学习水中大肠菌群的检测原理和方法 仪器和材料 样品 培养基 染料 其他 原理 操作方法与步骤 多管发酵法 滤膜法 实验九 水中细菌总数的测定 目的 学习水中细菌总数的测定方法 了解平板菌落计数的原则 仪器及材料 原理 操作步骤 准备工作 滤膜灭菌 滤膜过滤器安装 过滤水样 观察结果 挑取符合大肠菌群菌落特征的菌落进行革兰氏染色，镜检。 将镜检验员革兰氏服性、无芽孢杆菌的菌落再接种一支乳 糖蛋白胨发酵管，经370c培养24h，产酸又产气者即为大肠菌群阳性 计算 1L水样中的大肠菌群数= (个/L) * * 第十章 微生物的实验 实验一 显微镜的使用及细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察 (一)目的 (1)掌握显微镜的结构,原理,学习显微镜的操作方法和保养. (2)观察细菌,放线菌和蓝细菌的个体形态,学会生物图的绘制. (二)实验器材 (1)显微镜,目测微计,物测微计,擦镜纸,香柏油,二甲苯. (2)示范片 大肠杆菌 小球菌 蓝藻等 （二）、实验内容 1.显微镜的结构 （ 1）. 机械部分 （2）.光学部分   （2）光学部分a.目镜b.物镜: 低倍物镜 高倍物镜 油镜物镜的性能由数值孔径决定 数值孔径=n*sina/2显微镜的性能还依赖于物镜的分辨力分辨力:能分辨两点之间的最小距离的能力 增大数值孔径来提高分辨力.物镜 N.A.1.25,100*,”OI”,160/0.17,16mm---- N.A.1.25数值孔径 100*放大倍数 ”OI”油镜 160镜筒长 0.17要求盖玻片的厚度 16mm焦距C.聚光器d.反光镜f.滤光片  2.显微镜使用和保护 (1)低倍镜的使用法(2)高倍镜的使用法(3)油镜的使用法 3.目测微尺,物测微尺及其使用方法(1)目测微尺(2)物测微尺(3)目测微尺的标定(4)菌体大小的测量4.细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察 (四)实验报告 实验三 微生物直接计数法 (一)目的 （1）明确显微镜计数的原理． （2）学习使用血球计数板进行微生物计数的方法 （二）仪器与材料　显微镜　血球计数板　移液管　酵母菌液 （三）血球计数板的结构与计算方法 （1）16＊25的计数板计算公式 细胞数／ｍｌ＝125小格内的细胞数＊400＊10＊1000＊稀释倍数／125 （2）25＊16的计数板计算公式 细胞数／ｍｌ＝80小格内的细胞数＊4＊10＊1000＊稀释倍数／80 四）操作步骤 （1）稀释样品 使每格约5个细胞（2）取干净的血球计数板，用厚盖玻片盖住中央的计数室，用移液管吸取少许充分摇匀的待测菌液于盖片的边缘，菌液则自行渗入计数室，5～10min即可计数（3）将血球计数板置于载物台上，用低倍物镜找到小方格网后换用高倍镜观察计数 每样品重复三次，取平均值，计算每1ml菌液中所含的酵母菌数。 （五）试验报告 实验四 微生物的染色 目的 学习微生物涂片染色的操作技术,掌握微生物的普通染色法(单染色法)和革兰氏染色法 实验仪器和材料 实验步骤 单染色 革兰氏染色 涂片 干燥 固定 染色 水洗 吸干 镜检 取大肠杆菌和枯草杆菌芽孢杆菌(均以无菌操作)分别做涂片,干燥,固定.方法同单染色法 用草酸铵结晶紫染色1min,水洗. 加革氏碘液媒染色1min,水洗 斜置载玻片于一烧杯上,滴加95%酒精脱色,至流洗出的酒精不呈现紫色时,立即用水冲净酒精,脱色时间约20min,或视涂片厚薄而略有差异 用番红(或称沙黄)染液染色1~2min,水洗 吸干,置于显微镜下观察,阳性者为紫色,阴性者为红色 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度.如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌 菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应 实验五 培养基的制备及灭菌 一 目的 1玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作 2掌握培养基的配制方法 3会干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法 二 实验材料 三 实验内容 1玻璃器皿的洗涤剂包装 A洗涤 培养皿、试管、锥形瓶等可用去污粉或肥皂，自来水冲净。移液管用洗液浸泡在水