实验四 线粒体和液泡系的超活染色与观察课件.ppt

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根据所用染色剂的性质和染色方法的不同,通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内,染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里,达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色,它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分,主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子,酸性染料的胶粒表面带阴离子,而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子,这样,它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用,应选择那些对细胞无毒性或毒性较小的染料,而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用,可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性,易于被细胞吸收。詹姆斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料,对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 詹纳斯绿 B是线粒体的专一性活体染色剂,线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。 中性红为弱碱性染料,3-氨基-6甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐。对液泡系的染色有专一性,只将活细胞中的液泡系染成红色,细胞核与细胞质完全不着色,这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 线粒体是细胞内重要的细胞器,线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶,该酶能使詹姆斯绿B保持在氧化状态,呈现蓝绿色从而使线粒体显色,而细胞质中的染料被还原成无色。 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所,有十分重要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂,将液泡染成红色。在活细胞中,细胞质和细胞核不着色。如果细胞死亡,染料会弥散开来,使核着色。 三、实验用品 (一)器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸等。 (二)试剂 1、Ringer 溶液 氯化钠0.85g(变温动物用0.65g) ;氯化钾 0.25g ; 氯化钙 0.03g ;蒸馏水100ml 2、10%、1/3000中性红溶液 称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液,稍加热(30~40度)使之很快溶解,用滤纸过滤,装入棕色瓶于暗处保存,否则易氧化沉淀,失去染色能力。 临用前,取已配制的1%中性红溶液1ml,加入29ml Ringer溶液混匀,装入棕色瓶备用。 3.1%、1/5000詹姆斯绿B溶液 称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中,稍加 微热(30~40度)使之溶解,用滤纸过滤后,即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液,即成1/5000工作液,装入瓶中备用。最好现用现配,以保持它的充分氧化能力。 (三)材料 人口腔上皮细胞 小麦根尖细胞 四、实验步骤 (一)线粒体的超活染色与观察 1、线粒体是细胞进行呼吸作用的场所,其形态和数量虽不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。 1)人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 ⑴取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上,滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。 四、实验步骤 ⑵实验者用牙签宽头在自己口腔颊部粘膜处稍用 力刮取上皮细胞,将第一次刮下的粘液状物洗 去,将第二次刮下的粘液状物放入载玻片的染液 滴中,染色10~15min(注意不可使染液干燥, 必要时可再加滴染液),盖上盖玻片,用吸水纸 吸去四周溢出的染液,置显微镜下观察。 ⑶在低倍镜下,选择平展的口腔上皮细胞,换高 倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核 周围胞质中分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或 短棒状的结构,即线粒体。 二、液泡系的超活染色与观察 中性红为弱碱性染料,对液泡系(即高 尔基体)的染色有专一性,只将活细胞中的 液泡系染成红色,细胞核与细胞质完全不着 色,这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察 ⑴ 实验前,把小麦培养在培养皿内潮湿的滤纸上,使其发芽,胚根生长到1cm以上备用。 ⑵ 用双面刀片把小麦幼苗根尖(约1~2cm长)小心切一纵切面,放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中,染色5~10min。 ⑶ 吸去染液,滴一滴Ringer液,盖上盖玻片,并用镊子轻轻地下压盖玻片,使根尖压扁,利于观察。 ⑷ 在高倍镜下,先观察根尖部分的生长点的细胞,可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡,这是初生的幼小液泡。然后,由生长点向延长区观察,在一些已分化长大的细胞内,液泡的染色较浅,体积增大,数目变少。在成熟区细胞中,一般只有一个淡红色的巨大液泡,占据细胞

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