实验：脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定课件.ppt

医学生物学实验 医学微生物教研室 2011年6月 实验八脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定 实验内容 脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定 目的 熟悉临床标本中常见化脓性细菌的分离鉴定程序；掌握细菌分离培养的基本技术。 实验器材 标本：脓拭子、感染分泌物或模拟脓汁标本 菌种：金黄色葡萄球菌培养物、表皮葡萄球菌 培养基：血琼脂平板、甘露醇发酵管 其他：血浆、生理盐水、革兰染液、玻片、滴管 培养箱、 酒精灯、接种环等 检查原则 在脓汁标本中，以化脓性球菌最为常见，本实 验主要检测金黄色葡萄球菌 用药前采集标本 无菌操作 检查方法和结果报告 血浆凝固酶试验（玻片法）： 用灭菌接种环取标本和白葡菌（阴性对照）培养物少许，分别与玻片左右二侧的生理盐水制成均匀菌悬 于玻片玻片左右二侧菌悬液中各加血浆一滴并轻轻摇匀 1~3分钟内观察结果，出现颗粒状凝集为血浆凝固酶试验阳性，否则为阴性 实验报告 本次实验的目的要求、器材、检查原则、标本检测程序 （简要）、结果报告和结论 * * 标本检测程序 脓汁、脓性分泌物（未知菌液/固体培养物） 涂 片 革兰染色 镜 检 血琼脂平板 接种 直接 菌落观察 血浆凝固酶试验 甘露醇发酵 诊断报告 检查方法和结果报告 直接显微镜检查：取标本直接涂片，均匀涂成菌膜，自然干燥，固定后革兰染色，油镜观察。 注：若染色后未发现细菌，可报告“直接镜检未发现细菌” 金黄色 葡萄球菌 革兰染色镜检 ───────── 形态 排列 染色性 检查方法和结果报告 细菌分离培养：取脓液或创伤分泌物接种于血琼脂平板上（接种后4℃保存），划线分离，37℃培养18~24h后，观察菌落特征，取单个菌落进行革兰染色镜检。 注：第2天观察记录结果；如培养48~72h后仍然无菌生长，则报告“无细菌生长”。 金黄色 葡萄球菌 血平板培养结果观察 ───────────── 菌落特点 溶血性 菌落颜色 结果报告： 阳性（+）/阴性（─） 标本+血浆 白葡菌+血浆 检查方法和结果报告 甘露醇发酵试验：无菌操作取标本和白葡菌（阴性对照）培养物分别接种于甘露醇发酵管，其上覆盖无菌液体石蜡油，37℃培养18~24小时，观察结果。金葡菌发酵甘露醇产酸，使培养基变混浊，颜色由紫色变黄色，是为甘露醇发酵试验阳性，而白葡菌相反。 注：第2天观察记录结果 阳性（+）/阴性（─） 标本+甘露醇 白葡菌+甘露醇 *