徐元宏-加强微生物监测提高抗感染治疗水平(研究生)课件.ppt

(4)液体稀释法确证: 培养基: CAMHB 药物浓度: 头孢他啶0.25-128μg/ml, 头孢他啶/克拉维酸0.25/4-128/4μg/ml和头孢噻肟0.25-64μg/ml,头孢噻肟/克拉维酸0.25/4-64/4μg/ml。确证试验需要同时使用头孢他啶、头孢噻肟，单独和联合克拉维酸复合制剂。 接种: 按标准肉汤稀释法的规定进行 孵育条件: 35℃空气 孵育时间: 16-20小时 结果判读: 对2个中任何一个药物的MIC，在加入克拉维酸后，MIC与不加克拉维酸的MIC值降低3个以上对倍稀释度，判定为ESBLs（如头孢他啶的MIC=8 μg/ml，头孢他啶/克拉维酸的MIC为1 μg/ml）。 质控建议:肺炎克雷伯菌ATCC700603：联合克拉维酸的复合制剂的MIC与单药的MIC相比，应当降低3个以上对倍稀释度。 治疗原则是：1.碳青霉烯类抗生素，2. β-内酰胺类/酶抑制剂,3.氨基糖苷类抗生素如阿米卡星，4.头霉烯抗生素如头孢西丁。在超广谱β-内酰胺酶 检测条件不具备的地方，临床可以通过实验室报告的作推测治疗，若药敏报告提示三代头孢例如头孢泼肟、头孢他啶、氨曲南、 头孢噻肟、头孢曲松有二者以上耐药极有可能是产超广谱β-内酰胺酶 。 4、D试验-克林霉素诱导耐药试验 ： 葡萄球菌对大环内酯类抗生素耐药表现为：①由msrA基因介导的主动外排机制，即M型耐药；②抗生素作用靶位的改变，即由erm基因编码的RNA甲基化酶对细菌核糖体50S亚基23SrRNA进行特定核苷酸残基甲基化，使药物与靶位的结合能力下降，导致对具有相同靶位的大环内酯类、林可酰胺类、链阳菌素B三类药物同时耐药，临床称为MLS型耐药。体外药敏试验又可将MLS型分为结构型（cMLS型）和诱导型（iMLS型）；cMLS型为红霉素和克林霉素均耐药；iMLS型红霉素耐药、克林霉素敏感。 对大环内酯耐药的葡萄球菌可能对克林霉素的耐药,通过erm 基因编码的23S rRNA 甲基化也称为MLSB（大环内酯、林可和B 型链阳霉素）耐药，或只对大环内酯类耐药（由msrA 基因编码的外排机制）。 M-H平板或血平板，纸片相邻试验，对于葡萄球菌，距红霉素纸片（15μg/片）边缘15～26mm 处放置克林霉素纸片(2μg/片)来进行检测；对于β-溶血链球菌，将克林霉素纸片(2μg/片)和红霉素纸片（15μg/片）贴在相邻的位置，纸片边缘相距12mm。 35℃空气，16-24h孵育后，克林霉素抑菌环不出现“截平”现象，应报告分离株对其敏感。邻近红霉素纸片侧克林霉素抑菌环出现“截平”现象（称为“D”抑菌环），提示存在可诱导的克林霉素耐药，应报告分离株对其耐药，在报告中应注明“通过诱导克林霉素耐药试验，推测此菌株对克林霉素耐药，克林霉素对某些病人可能仍有效”；若无“截平”现象，则应报告菌株对克林霉素敏感。 谢谢！ 革兰阴性球菌主要依据氧化酶、DNA酶、生化反应来鉴别，淋球菌氧化酶阳性、DNA酶阴性、葡萄糖阳性、乳糖阴性、麦芽糖阴性、甘露糖阴性、蔗糖阴性；脑膜炎奈瑟氏菌氧化酶阳性、DNA酶阴性、葡萄糖阳性、乳糖阴性、麦芽糖阳性、甘露糖阴性、蔗糖阴性。革兰阳性杆菌主要依据菌体、菌落，特征性染色来鉴别，结核分枝杆菌抗酸染色阳性，白喉棒状杆菌Albert染色出现异染颗粒，产单核李斯特菌溶血性和动力。革兰阴性杆菌主要依据氧化酶、氧化-发酵（O-F）试验来判断。 氧化酶阴性、氧化-发酵（O-F） 发酵 肠杆菌科编码 补充生化反应鉴定到种。对于致病性大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌还需血清学凝集。 氧化酶阴性、氧化-发酵（O-F） 氧化 非发酵菌编码 氧化酶阳性、氧化-发酵（O-F） 氧化/- 补充生化反应鉴定到种。 氧化酶阳性、氧化-发酵（O-F）发酵 弧菌科编码 补充生化反应、血清学凝集鉴定到种，如霍乱弧菌O1、O139等。 对于真菌而言，主要依据菌体形态、菌落形态、色素， 同化试验、发酵试验来鉴别至种属。 实验室人员困惑：由于上述细菌、真菌鉴定依靠表型特征，表型是受基因控制，同一基因型可能有不同种表型，同一表现型可能受不同基因型所控制。根据表现型判断的菌体能代表真正的菌属吗？随着分子生物学的发展，人们能任意改造表现型。我们能有所作为吗？ 三、恰如其分报告药敏结果 药敏试验中药敏纸片选用：临床医生经常反映，实验室所报告的药敏试验