微丝的显示-考马斯亮蓝法课件.pptVIP

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2016-12-21 发布于浙江
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微丝的显示-考马斯亮蓝法课件.ppt

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微丝的显示:考马斯亮蓝法显示细胞中的微丝山东师范大学生命科学学院邢维贤目的要求基本原理实验用品方法与步骤实验结果实验报告目的要求掌握考马斯亮蓝的染色方法；了解细胞内微丝的分布。实验原理细胞质中错综复杂的纤维网络结构称为细胞骨架，主要包括微管、微丝和中间纤维。考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白染料，它可以使多种蛋白质着色，由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定，有些类型的纤维太细，在光学显微镜下无法分辨，因此我们看到的主要是微丝组成的张力纤维。张力纤维在体外培养细胞中普遍存在，与细胞的附着、维持扁平铺展的形态有关。实验用品 1．器材：烘箱、青霉素小瓶、培养细胞飞片、水浴锅、载玻片、盖玻片。 2．试剂: 0.01mol/L PBS；M-缓冲液；1%TritonX-100/M缓冲液；0.2%考马斯亮蓝染液；3%戊二醛-PBS溶液； 3．实验材料：洋葱内表皮，培养细胞飞片方法与步骤利用培养细胞为材料进行骨架显示时,先从培养箱中取出培养细胞飞片,弃去培养液,加入PBS漂洗,加入1%TritonX-100/M-缓冲液处理15分钟; M缓冲液轻轻洗3次,然后加入3%戊二醛-PBS液固定15分钟，PBS冲洗数次，0.2%考马斯亮蓝R250染色30分钟，水洗，镜检。以洋葱为材料进行细胞骨架显示时，先撕取一片洋葱内表皮，置于小平皿中进行操作，其余步骤相同。注意事项 PBS冲洗应适度，否则洋葱表皮细胞吸收大量水分易使液泡过分涨大，影响实验结果的观察。实验操作中，Triton的抽提是最关键的步骤，应注意抽提适度。实验结果洋葱内表皮中的微丝培养细胞中的微丝实验报告绘图表示细胞中微丝的分布