第二章八植物种质资源的保存(胡).ppt

* * 植物种质资源保存技术 * 杜仲种子超干贮藏两年后效果的比较。(a)超干种子室温贮藏，含水量3.3%，发芽率97%，活力指数26.7；(b)-200C贮藏，含水量8.4%，发芽率96%，活力指数24.1；(c)对照种子室温贮藏，含水量7.5%，生活力基本丧失。 * 一、超低温保存技术 * 超低温保存：-80℃ 下保存:液氮保存（1）长期保存种质的遗传特性（2）保持细胞形态发生能力（3）珍稀物种的保存（4）长期保存去病毒材料（5）防止种质衰老（6）延长花粉寿命（7）国际交流（8）创造新的种质资源：耐低温（9）设备简单  1、 超体温保存的意义 * 2、植物超低温保存的原理 低温伤害：细胞内部结冰 细胞质溶液浓缩 加冷冻保护：二甲基亚砜、PEG、甘油 （1）水合作用，提高溶液的黏滞性 （2）增加细胞透性，防止细胞内结冰 （3）减少冰的形成，减少组织内溶质数量的迅速提高 （4）保护质膜，特别是糖类物质 * 3、超低温保存的基本技术 （1）材料准备：选择合适的外植体 （2）材料预处理： 继代、高渗、低温锻炼、ABA处理 （3）加冷冻保护剂 关键：0℃ （4）超低温保存 -196℃ （5）解冻（快速解冻） （6）培养与再生 * （1）茎尖组织（2）幼剑或胚状体（3）悬浮细胞（4）愈伤组织（5）原生质体（6）花粉（7）DNA 4、超低温保存的材料 * （1）预培养与低温处理 7~12天，加山梨醇、ABA，或增加糖浓度 低温预处理：0~-20 ℃ （2）冷冻保护剂处理 冷冻保护剂0 ℃ +培养基混合（有毒，时间hr）（3）降温处理 快速冷冻、慢速冷冻、2步法冷冻、逐级冷冻法（4）化冻方法 快速化冻法:37 ℃  慢速化冻法:0 ℃ 2~3 ℃ 室温 5、植物超低温保存一般技术 * 6、植物超低温保存其它技术 （1）玻璃化法： 高浓度玻璃化保护剂处理 液氮保存 冷冻保护剂的选择和浓度搭配 玻璃化法基本程序： 预培养 保护剂加前过渡 保护剂处理 降温 化冻和洗涤 恢复培养 玻璃化法的技术要点： 材料：不同材料要求不同 保护剂：处理浓度、时间和温度 化冻和洗涤：洗涤剂种类、浓度和时间 * （2）包埋脱水法 含有样品的褐藻酸钠滴向高钙溶液 褐藻酸钙 +高浓度蔗糖预处理 提高样品抗冻力 液氮 包埋脱水法的优越性： 与玻璃化法一样简便，避免保护剂的毒害作用 保存材料直接成苗，不需经愈伤组织阶段 技术环节： 包埋方法：高糖处理再包埋/包埋后高糖处理 褐藻酸钠浓度、蔗糖浓度，处理时间 保存前脱水是关键 再培养：去褐藻酸钙 * （3）干燥冷冻法 即快速冷冻保存：适度干燥、适度脱水 技术关键： 直接干燥脱水：用得不多 高浓度糖预处理： 度浓度糖预处理 脱水 * 7、冷冻后细胞活力测定 TTC法： 显示细胞内脱氢酶的活性 刚死细胞仍能染色，不正确 FDA法： 渗入活细胞后发荧光 色谱分析法： 不破坏材料：测定生物体产生的挥发气体 再培养法： 最可靠 遗传稳定性检测： * 8、提高存法率的方法 （1）材料的选择： （2）冷冻前预处理 （3）选择合适的保存方法 （4）选择合适的保护剂 （5）正确应用解冻方法 （6）化冻和洗涤 （7）再培养 （8）抗冻蛋白与种质保存 * 最小生长保存法： 高糖、加山梨醇、ABA 低温、高CO2 最常用的方法： 保存时间较短，但可以继代保存 二、低温保存 * 1、低温保存方法 （1）常温保存 热带作物对低温敏感，常温下生长十分缓慢 （2）常低温和低温 许多植物可在低温下保存 ：3~4