第四章 病毒与细胞的相互作用.ppt

人或动物细胞在一定条件下可在实验室的培养瓶内生长。 优点： 每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等 无个体差异，准确性和重复性好 可严格执行无菌操作，标准化。 细胞培养本身就能显示病毒的生长特征 应用空斑技术可进行病毒的克隆化 根据细胞的来源、染色体特征及传代次数，可分为三种类型： 原代细胞（primary cell） ：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。 二倍体细胞（diploid cell strain） ：将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。 传代细胞（established cell line） ：能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。 HeLa（人子宫癌细胞）、Vero（非洲绿猴肾细胞）、BHK-21（乳仓鼠肾细胞）、PK-15（猪肾细胞）等 第二节 病毒与细胞的相互作用 杀细胞感染 非杀细胞感染 引致持续感染，对细胞代谢无影响。 转化 产生干扰素 一、病毒引致的杀细胞变化 细胞病变效应(cytopathic effect,CPE) ：由病毒感染导致的细胞损伤。CPE能在光学显微镜下观察。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、坏死、溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能形成包涵体。 Formation of multinucleated cells. 包涵体的性质 病毒成分的蓄积，如狂犬病毒的Negri氏体 大量晶格样排列的病毒颗粒组成，如腺病毒的包涵体 细胞变性的产物，不含病毒，如疱疹病毒的包涵体 复习思考题 能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。 50%组织细胞感染量（TCID50） 在病毒感染过程中，宿主产生的抗体与病毒结合，非但未能阻断病毒吸附宿主细胞，反而增强了病毒对细胞的感染，提高了病毒的滴度。 抗体依赖病毒感染的增强作用（Antibody-dependent enhancement of viral infection, ADE） （一）空斑试验 将适当浓度的病毒悬液加入单层细胞培养中，当病毒吸附细胞后，再覆盖一层融化的琼脂。病毒在细胞内复制后产生局限性病灶，病灶逐渐扩大，肉眼也能看见，此即空斑(plaque)。 空斑试验的用途： 1. 测定病毒数量——PFU/mL 2. 纯化病毒 单个空斑作悬液，梯度稀释后再作空斑，可获得病毒克隆。 3. 鉴定病毒 不同病毒的空斑具有不同的特征。 （二）包涵体（inclusion body) 定义：是某些病毒感染细胞产生的特征性的形态变化，在普通光学显微镜下可见胞浆或胞核内出现的呈嗜酸性或嗜碱性染色、大小数量不等的圆形或不规则形的团块状结构，称为包涵体。 * * 第四章 病毒与细胞间的相互作用 第一节 病毒的细胞培养 第二节 病毒与细胞的相互作用 Need for virus cultivation 病毒培养的必要性 ?分离鉴定Isolationand identification ? 诊断Scientific and diagnostic purposes ? 疫苗生产Vaccine production 第一节 病毒的细胞培养 病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 Culture systems of viruses 不同病毒（宿主）培养系统不同 *Bacteriophages (viruses that infect bacteria)——噬菌体 *Plant virus *Animal virus 动物接种： 接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。 按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。 实验动物的个体差异，动物保护问题。 Suckling mice guinea pig Nonhuman Primates 鸡胚接种： 一种比较经济简便的方法。 Egg Candling 可采用绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔接种。 组织培养（tissue culture）＝细胞培养（cell culture） （一）细胞的类型 （二）细胞培养的方法 静置培养：实验室常用。细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养，细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单层。 旋转培养：大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞帖附于玻瓶四周，长成单层。 多瘤病毒、腺病毒 鼠、禽白血病病毒 否，致肿瘤DNA病毒 是，致肿瘤反录病毒 细胞形态改变，