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问题探讨: 1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时,为什么要留出一部分样液? * * * 斐林试剂 苏丹Ⅲ 橘黄色 红色 砖红色沉淀 紫色 苏丹Ⅳ 双缩脲试剂 鉴定物质 试剂 实验现象 还原性糖 脂肪 蛋白质 淀粉 碘 蓝色 必修1第18~19页 生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 实验原理 溶液呈紫色 双缩脲试剂NaOH和CuSO4 蛋白质的鉴定 砖红色沉淀 斐林试剂NaOH和CuSO4 可溶还原糖的鉴定 结果 加热与否 方法 溶液浓度 原理 试剂及成分 比较项目 4、斐林试剂与双缩脲试剂两者有何不同? 新配制的Cu(OH)2 溶液与加入的葡萄糖,在加热条件下生成砖红色的Cu2O 在碱性 环境下 的Cu2+,与类似于双缩脲结构的肽键发生反应生成紫色终合物 NaOH 浓度为 0.1g/mL CuS04 浓度为0.05g/mL NaOH 浓度为 0.1g/mL CuS04 浓度为0.01g/mL 先把NaOH 溶液和CuSO4 溶液混合, 而后立即使用。 先加入Na0H 1mL,然后 再加CuS04 4滴,摇匀。 (不能过量) 水浴 加热 不 需 要 5、实验的材料的选择和处理有什么要求? 材料的选择 材料的处理 还原性糖的鉴定 脂肪的鉴定 含糖高,颜色为 白色的植物组织, 如苹果和梨 富含脂肪的种子 ,如花生 浸泡3~4小时 / 蛋白质的鉴定 富含蛋白质的 黄豆或鸡蛋清 黄豆需浸泡1-2天,鸡蛋清要先稀释 淀粉的鉴定 马铃薯 / 选材:含糖量较高的白色或近于白色的植物组织(排除色素对 显色的干扰),苹果、梨最好 。 实验流程(步骤) 1.可溶性还原糖 制备组织样液: 制浆:去皮、切块、研磨, 过滤:(用单层纱布) 取液:(2mL) 显色反应 现象: (用前混匀) 50~65.C水浴 加热2min 还原糖的检测结果 2.脂肪的鉴定 取材:花生种子(浸泡3-4h),去皮,将子叶削成薄片 制片: ①选取最薄的薄片移至载玻片中央 ②在薄片上滴加苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ) 染液2 - 3滴,染色 2-3min ③滴加体积分数为50%的酒精溶液1—2滴,洗去浮色 (多余的苏丹Ⅲ ) ④吸去余液,滴1-2滴蒸馏水,盖上盖玻片,制成临时装片 显微观察: 先在低倍镜下找到已着色的薄片,后用高倍镜观察 现象: 有被染成橘黄色(或红色)的脂肪微粒 脂肪微粒 脂肪的检测结果 3.蛋白质的鉴定 选材与制备 组织样液: 黄豆组织样液(或鸡蛋蛋清稀释液) [黄豆浸泡 →去皮→切片→研磨→过滤→滤液] 显色反应 现象: 无色 紫色或紫红色 (创设碱性条件) (提供Cu2+) 蛋白质的检测结果 4.淀粉的鉴定 取材:马铃薯匀浆 检测: 碘液2滴 现象: 摇匀后变成蓝色 作对照 2、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3~4滴而不能 过量? 过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应,使溶液呈蓝色,而掩盖生成的紫色。 3、为什么斐林试剂要现配现用,不能放置太久? 时间太长,Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。 深化 1、(山东)从细胞腊上提取了某种成分,用非酶法处理 后,加入双缩脲剂出现紫色;若加入斐林试剂或班氏试剂 并加热,出现砖红色。该成分是: A 糖脂 B 磷脂 C 糖蛋白 D 脂蛋白 C 练习 解析:用双缩脲试剂处理该物质会产生紫色反应,说明其含蛋白质;加入斐林或班氏试剂在加热条件下会产生砖红沉淀,说明该成分含糖。即该成分含蛋白质又含糖,由此判断该成分为糖蛋白。 2、(2011.广东)生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质三种有机物的鉴定实验中,以下操作错误的是( ) A、可溶性还原糖的鉴定,可用酒精灯直接加热产生砖红色沉淀 B、只有脂肪的鉴定需要使用显微镜 C、用双缩脲试剂检测蛋白质不需要加热 D、使用斐林试剂和双缩脲试剂最好是现配现用 A 3、安徽阜阳劣质奶粉事件震惊全国,引起世人注目。鉴定脱脂淡奶粉是否为伪劣产品,肯定不需要用到的化学试剂是( ) A.斐林试剂 B. 红墨水 C.双缩脲试剂 D.苏丹Ⅳ染液 B *
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