细胞评价生物材料概论.docx

[公司名称][文档标题][文档副标题]nny[日期]摘要随着时间的发展，越来越多的材料应用于生物方面，而生物学的检测显得至关重要。细胞检测生物材料性能是其中必要一环。目前，细胞检测包括细胞形态评价，细胞膜检验，细胞活性检验，细胞粘附、迁移、增殖检测，细胞周期检验等。关键词：生物学检测，细胞检测，材料AbstractWith time goes by, there are increasing number of biomaterial for which biological testing is very significant and one of Cell testing. Now cell testing includes Cell morphological evaluation, Membrane test, cell activity test, Cell adhesion, migration, proliferation test, cell cycle checkpoint.Key words: biological testing, cell testing, material 目录摘要I1绪论12 细胞评价方法22.1 细胞形态学评价22.2 细胞膜评价22.2.1中性红摄取实验22.2.2 乳酸脱氢酶检测（LDH释放法）22.3 细胞活性代谢评价32.3.1 MTT试验32.3.2 XTT试验42.3.3 MTS试验42.3.4 WST-8?试验52.4 细胞粘附、扩散、增殖52.5 细胞周期检测63 结论7感谢91绪论生物材料的临床应用已有较长的历史，广泛应用于牙科、眼科、整形外科及心血管外科等领域。随着生物医学工程的发展, 许多新型生物材料不断涌现，为了确保人体健康,一种新的生物材料在进入临床之前必须进行生物学评价。完整的生物学评价应包括初级急性毒性筛选、动物体内应用和临床试用 3级试验。体外细胞实验是初级急性毒性筛选的一个重要方面，是一种快速、简便 、重复性好又廉价的检测材料生物相容性方法，在评价材料生物相容性方面的地位已得到公认。细胞生物相容性评价是生物材料生物相容性评价的一项重要内容，细胞毒性试验作为检生物材料毒性的手段，具有简便、敏感性高、节省动物、节约经费、缩短生物材料研究周期优点，已被广泛应用于生物相容性评价。细胞毒性试验的定义为“用细胞培养方法进行毒理学风险评价”。自从 Kawahara[1]用细胞培养技术评价牙科材料的细胞毒性以来，已发展了数种细胞毒性实验方法，其中有放射性示踪法[ 2 ,3] 、琼脂覆盖法[ 4 -6] 、直接接触法[ 7 ,8] 和分子滤过法[9] 等。以往对生物材料的细胞生物相容性的评价往往只着眼于细胞的形态与数量的变化，随后发展到对细胞生长、附着、增殖及代谢方面的影响，并提出了以有活力的细胞数和细胞增殖能力作为评价生物材料细胞生物相容性的观点。细胞毒性试验是生物材料细胞生物相容性评价最常用的方法，细胞毒性评价方法种类繁多，GB/T16886 标准中按照材料与细胞的接触方式， 分为浸提液法（主要是 MTT 试验法）、直接接触法、分子滤过法和琼脂覆盖法。另有按照不同的生物学终点即不同评价指标进行分类的方法，如细胞形态学、细胞膜效应、细胞代谢活性、细胞增殖率等评价方法。近几年也不断涌现出新的细胞毒性试验评价方法， 如细胞周期、 细胞凋亡和细胞增殖相关蛋白检测等。2 细胞评价方法2.1 细胞形态学评价一种发展最早的定性细胞损伤检测方法，材料导致细胞损伤从而发生形态学的改变，通过显微镜下观察到变圆或裂解细胞所占的百分比来估算细胞毒性级别。细胞形态学评价的可信度较高。2008 年 Sujata[10] 等对显微镜下观察细胞形态毒性的定性判定方法与 MTT 法等定量细胞毒性判定法进行了比较，研究得出 Pearson 相关系数为0.9，说明二者具有良好的相关性。此外，由于该方法可直观地观察到材料细胞毒性的大小，所以目前仍被广泛用于生物材料细胞毒性的评价。2.2 细胞膜评价生物材料对细胞的毒性作用也反映在细胞膜的变化中 ,细胞膜结构和功能的完整对于将细胞与其周围环境分离起重要作用。细胞膜的变化可以反映细胞状态的变化。 2.2.1中性红摄取实验未受损的细胞可摄取中性红染料并将其蓄积在溶酶体内，用中性红染液洗脱剂（乙醇或乙酸） 溶解中性红，并通过酶标仪检测定量中性红，活细胞摄入中性红的水平与活细胞的数量成正比。国际标准 ISO 109935:2009 已收录该检测方法及具体的操作步骤。2.2.2 乳酸脱氢酶检测（LDH释放法）乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中，释放出