琼脂糖电泳技术1.ppt

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2016-12-21 发布于重庆
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琼脂糖电泳技术 2005.4 扬州琼脂糖电泳的用途判断扩增片断的大小回收扩增片断用于转印进行Southern印迹问题如何获得清晰的琼脂糖电泳照片呢？琼脂糖电泳结果的影响因素凝胶电泳液电压检测手段琼脂糖凝胶浓度的选择 1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比。 2、琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过20kb 。 3、不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度 /%???? 0.3????0.6???? 0.7???? 0.9???? 1.2???? 1.5???? 2.0线状DNA大小/kb??60-5??20-1??10-0.8??7-0.5??6-0.4??4-0.2??3-0.1 电泳缓冲液 DNA的泳动受到电泳缓冲液和离子浓度的影响。缺乏离子，电导率严重降低，电泳迁移率很慢；离子强度过高，电导率升高，极易产生大量的热能，最严重的结果是凝胶熔化，DNA变性常用的电泳缓冲液有TAE，TPE和TBE,其中TAE的缓冲容量最低，长时间电泳将被消耗。 * * *