TGF―β1及Smad4在卵巢上皮恶性肿瘤患者血清中的表达及其意义.docVIP

TGF―β1及Smad4在卵巢上皮恶性肿瘤患者血清中的表达及其意义 　　【摘要】目的 探讨及研究TGF-β1和 Smad4 在卵巢上皮恶性肿瘤中的表达及其意义。方法 应用ELISA法检测34例卵巢上皮恶性肿瘤及20例对照组中的血清水平。结果 卵巢上皮恶性肿瘤患者血清TGF-β1水平显著高于正常对照组，差别有统计学意义（Plt;0.01），血清Smad4水平高于正常对照组，差别具有统计学意义（Plt;0.05）。结论 联合检测TGF-β1和Smad4水平对判断预后具有重要价值。 　　本实验通过检测卵巢上皮恶性肿瘤和正常对照组血清TGF-β1和Smad4 水平，为卵巢癌的发病机制、诊断、监测、治疗和预后提供一定的实验依据。 　　【关键词】转化生长因子TGF-β1;Smad4蛋白;卵巢上皮恶性肿瘤 材料和方法 一般资料 选择2012年9月-2013年9月我院收治的卵巢上皮恶性肿瘤患者34例，所有患者均经病理确诊，年龄20-64岁，平均（40.37±8.49）岁。所有病例均未经放疗或化疗，均未手术治疗，均无免疫系统疾病或使用过免疫系统抑制剂。对照组20例均为健康女性，年龄25-62岁，平均（45.35±7.34）岁。 试剂和仪器 转移趋化生长因子β1-ELISA 试剂盒（美国GBD 公司），SMAD4-ELISA 试剂盒 （美国GBD 公司），离心机（湖南星科器械公司），酶标仪（英国 Labsystems Multiskan MCC/344） 　　1.3 实验方法 　　 严格按照ELISA试剂盒说明书进行操作，主要实验步骤如下： 　　1.取出血清样品（经离心处理后），室温平衡达30分钟，取出ELISA试剂盒，放置30分钟，实验过程在室温（20℃-25℃）内进行。 　　2.取出酶标板，将标准品依照次序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中。 　　3.空白微孔中加入50ul的样品，使标本中的抗原与固相抗体相结合，形成固相抗原-抗体复合物，空白对照中加入50ul的蒸馏水。 　　4.在各孔中加入100ul的酶标记溶液，固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体相结合（不含空白对照孔）。 　　5.将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应1小时。 　　6.充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压。 　　7.酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干。 　　8.各孔加入显色剂A、B液各50ul。 　　9. TGF-β1在20℃-25℃避光反应15分钟，Smad4在20℃-25℃下避光反应10分钟。 　　10.各孔加入50ul终止液，终止反应。 　　11. TGF-β1在30分钟内，Smad4在10分钟内均在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值。 　　12.用分光光度值自动分析软件得到各样品的浓度值。 　　1.4统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，以Plt;0.05时差异有显著性。 结果 　　（表1： 卵巢上皮恶性肿瘤及对照组的血清TGF-β1水平比较） 　　 分 组 例 数 浓度（?x ±s） 　　 健康对照组 2 0 302.62±25.69 　　卵巢上皮恶性肿瘤组 3 4 504.85±81.42 　　卵巢上皮恶性肿瘤组水平显著高于正常对照组，差别有统计学意义（Plt;0.01），结果见图表1 　　（表2： 卵巢上皮恶性肿瘤及对照组的血清Smad4水平比较） 　　 分 组 例 数 浓度（?x ±s） 　　 健康对照组 2 0 5.63±3.19 　　卵巢上皮恶性肿瘤组 3 4 12.30±6.35 　　血清Smad4水平高于正常对照组，差别具有统计学意义（Plt;0.05），结果见图表2 讨论 　　卵巢癌为妇科三大恶性肿瘤之一，病死率占居首位，而卵巢上皮恶性肿瘤占卵巢恶性肿瘤85%-90%[1，2]，因此只有在分子生物学水平上研究卵巢癌的癌变机制及恶性生物行为，提高早期诊断率尤为重要。转化生长因子TGF-β对正常细胞的生长起负调控作用，具有广泛的生物活性，不仅调节细胞的增值、分化、迁移和凋亡，还与细胞外基质的形成、免疫抑制及机会性感染等相关，TGF-β1是其主要存在形式，活性最强。Smad4蛋白是TGF-β超家族信号传导通路的中心环节，通路中任何一个环节异常均可导致信号传导通路紊乱，使肿瘤细胞在负反馈作用下TGF-β介导的生长抑制效应，加速肿瘤细胞的增殖、浸润和转移[3]。 　　目前普遍认为TGF-β1来自全身各组织，而且正常人群血清TGF-β1水平比较稳定，但是，当肿瘤或炎症发生时可表现为血清TGF-β1水平异常增高。Nowak M 等[4]研究表明晚期卵巢患者TGF-β1水平较