第三次实验血清总脂含量测定2013.11.1(免费阅读).ppt

实验报告问题 一、唾液淀粉酶活性实验 1、实验原理、操作步骤（总结不全、试剂未写且浓度不标） 2、反应现象的分析（没有出现理想的结果时的判定、改进的实验方案，方案的可行性） 3、抑制剂、激活剂的浓度必须标明、结果判定 （0.9%的NaCl是激活剂，但达到1/3饱和时就抑制唾液淀粉酶活性了） 4、专业用语（淀粉水解、活性降低，不是“分解”、“杀死”） 5、碘液 在标准情况下，碘单质的沸点为184.35℃，熔点为113.5 ℃，碘在45 ℃左右即开始升华，到77 ℃时碘升华管中已充满浓密的紫色碘蒸气。碘液见光与水发生歧化反应，分解形成碘化钾和次碘酸钾。 6、高温对结果的影响 淀粉的结构：天然的淀粉有直链淀粉和支链淀粉，直链淀粉的二级结构（指多糖链的折叠方式）是一个左手螺旋，每圈螺旋含6个残基，螺距0.8nm，直径1.4nm。 淀粉的螺旋结构并不十分稳定。当不与其他分子如碘相互作用时，直链淀粉很可能是以无规卷曲形式存在。碘分子正好能嵌入螺旋中心空道，每圈可容纳一个碘分子（I2），通过朝向圈内的羟基氧（提供未共享电子对）和碘（提供空轨道）之间的相互作用形成稳定的深蓝色淀粉和碘络合物。产生特征性的蓝色需要约36个即6圈的葡萄糖残基。(见书81页) 支链淀粉螺旋（约25-30个残基）中的短串碘分子比直链淀粉螺旋中的长串碘分子吸收更短波长的光，因此支链淀粉遇碘呈紫色到紫红色。 7、酶实验必须控制哪些条件？ 酶的化学本质是蛋白质，它极易受外界条件的影响而改变它的构象及性质，因而也必然会影响到它的催化活性。酶对温度、 pH、酶浓度及某些离子浓度等变化很敏感。 (1)pH值对酶活性的影响 酶的活性受环境pH的影响极为显著，通常各种酶只有在一定的pH范围内才能表现出它的活性。一种酶表现其最高活性时的 pH值称为该酶的最适pH。高于或低于最适pH值时，酶的活性降低。酶的最适pH值受酶的纯度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。 (2)温度对酶活性的影响 每种酶都有其最适温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言，若酶处于过高的温度环境中，会使酶活性永久地丧失；而若处于极低温度的环境中只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。 (3)酶浓度对酶促反应速度的影响 在其它条件不变的情况下，若反应物浓度大大高于酶浓度时，则反应速度随酶浓度增加而增加，两者间成正比关系，即：V=k[E]。但若反应底物浓度较低，而且酶的浓度足够高时，增加酶浓度，反应速度基本不变。 (4)离子对酶活性的影响 就唾液淀粉酶而言，低浓度Cl一可以增加酶活性，高浓度的Cl一或者低浓度的Cu2+则会抑制酶的活性，而低浓度的Na+、SO42-等对酶活性没有影响。不同的酶对不同的离子具有不同的效应。 二、血糖的测定 1、实际用量减半 2、结果分析（两个样本值的比较，与健康家兔的比较80-120mg/100mL，结果偏高与氧化的关系判断错误） 3、测定管颜色深浅的处理（稀释！） 4、定性实验仪器型号的记录 5、实验改进：标准曲线的制作 实验过程中的问题： 1、协作实验、合理分工 2、损坏物品登记及处理 3、移液器使用：用完后调到量程的最大值，按组放好。 4、试管、试剂瓶清洗 5、实验结束后：检查移液器数量、装配枪头、整理桌面及试剂，试管、三角瓶等洗净后按规格分装及白瓷盘中烘干，擦净桌面及试剂架，老师或研究生检查后才能离开。 6、值日生按值日表执行，负责打扫及协助试剂的分装等工作。 7、预习报告抽检：老师随机抽查并记分。 8、实验报告写明姓名、班级、学号，学委按序排列后在实验结束后的第三天上交。 实验五 血清总脂含量测定 （香草醛法） 二、实验原理 血清中的脂类，尤其是不饱和脂类与浓硫酸共热作用，经水解后生成碳正离子，试剂中的香草醛与浓磷酸的羟基作用生成芳香族的磷酸酯，由于改变了香草醛分子中的电子分配，使醛基变成活泼的羰基。此羰基即可与碳正离子起反应，生成红色的醌化合物，其强度与碳正离子成正比。 香草醛法 优点： （1）采用胆固醇（或橄榄油）作标准的测定法，结果比较接近实际情况。 （2）方法简易，常用方法。 缺点：不能准确测定总脂含量。 （不饱和脂类比饱和脂类呈色强。血清中饱和脂类 与不饱和脂类的比例约为3：7。要测定血清