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Delta Vision高分辨率活细胞成像系统 杜军 生物技术研究所 软硬件特点： 当样品较大的时候，或者我们用高倍镜来观察一个样品的全貌的时候，需要将这些图片拼接到一起。 2.设计并运行一个3D实验 1.在Resolve3D窗口中， 滑动钮来调节焦距，这一平面的荧光亮度要最强。 2.在Resolve3D窗口中，调节透光率和曝光时间，使荧光值为步骤一中的一半作用。 1 2 一般情况是缩短曝光时间。 3. 选择合适的光栅。 4.拖动滑动钮，分别标记要扫描的最上层和最底层， 标记要扫描样品的厚度。 3 4 5.点击Experient按钮，然后再点击Design Experiment 和Sectioning 选择框,进行相关的设定。 5 ***如果使用60X物镜的话，使用默认值0.20，如果使用其它物镜的话，可以查看目镜一栏推荐的值。 6.加入要设定特定的切片厚度，可以设定Number of optical sections和Sample thickness ，然后点击Get thickness 6 7.保存并运行试验。 3D 试验设计中的一些概念 选择合适的光栅 1.利用控制面板上的箭头按钮或操作杆移动载物台，寻找自己感兴趣的细胞。 2.点击控制面板上 按钮，标记细胞 3.重复步骤1,2，标记多个细胞 4.执行下列操作： 5.在Resolve3D窗口，选择 6.在Point List，选择具体的点，然后选择Visit Point去观察这些点。 7.在Stage view窗口，应用XY Stage Control 去精细调结这些点，用Z Control 去调节焦平面。 8.在Point List窗口，点击Replace Point来确定新调节点的位置。 9.重复6-8，将所有点的位置全部重新调节。 10.选择Delete Point删除不需要的点。 11.点击Save List，输入文件名称，并保存文件。 12.点击Optimize List,计算最快的扫描路径。 13.点击Point,,激活Visit Point List checkbox，然后输入点的名称。 14.点击 运行操作。 2.在Image display mode 的下拉框中选择Point Track。 1.在Resolve 3D窗口中点击Settings 进入Resolve 3D Setting 窗口。 3.选择Save Settings 和Done 保存选择。 3.设计一个延时扫描实验 1. 在Design Experiment 窗口中，点击Time-lapse按钮。 2. 选中Time-lapse选择框 3. 选中Lamps Offs when finished选择框 4. 设定Time interval及其它参数 利用Actions命令进一步优化实验 1.在Resolve3窗口中选择Design Experiment按钮，然后点击Actions 2.对于动态观察的实验，选择Use Fast Acquisition，可以快速地捕获图像。 3. 点击，选择Fast Acquisition Options，出现下列窗口 先多波长扫描，然后Z扫描，适合于多个荧光的比较的实验 先进行Z轴扫描然后进行多波长扫描，这种扫描方式较快 用于单波长扫描 用于多波长扫描 用于延时扫描 4. 选择Use Conventional Time-lapse 选择框 5. 点击Done，返回Action窗口 6. 点击+，添加其它的命令。 6 7. 在When column，添加其它的命令。 8. 在Options 命令框中浏览这些命令。 4.从活标本中捕获数据 1.在Resolve3D窗口，点击Experiment按钮，打开Design/Run Experiment窗口 2. 点击Design Experiment 和Time-lapse按钮。 3. 选中Image-based Autofocus before imaging 4. 点击Autofocus Options 5.选中Automatically determine parameters按钮，下面的参数即可进行修改。 6.点击Saving Settings和Done Tracking Cells 1.在Resolve3D窗口，点击Experiment按钮，打开Design/Run Experiment窗口 2. 点击Design Experiment 和Time-lapse按钮。 3. 选中Enable C