第六章 一般毒性21.ppt

毒性评价或安全性评价的基本目的 受试物毒作用的表现和性质 剂量－反应（效应）研究 确定毒作用的靶器官 确定损伤的可逆性 其它：敏感检测指标和生物学标志、毒作用机制、毒物动力学、中毒的解救措施… 毒性试验的设计不是为了证明化学品的安全性，而是为了表征化学品可能产生的毒作用。 统计原则 实验动物选择原则 剂量分组与设计 试验期限 给受试物途径 质量控制 实验设计过程应遵循基本原则 随机、对照、重复 第三节 局部毒性试验 (Local toxic effect) (Local irritant effect) 机体暴露于化学物后，在其接触和暴露部分造成的局部毒性损伤、刺激（如眼刺激、皮肤刺激）和（或）变态反应等 农药、化妆品、消毒剂的常规项目 刺激性、腐蚀性、致敏性 家兔 眼刺激性：眼球表面接触受试物后产生的可逆性 炎性变化 眼腐蚀性：眼球表面接触受试物后产生的不可逆 性组织损伤 一、眼刺激试验 Draize眼刺激试验（标准方法） 9只家兔，每只兔的一只眼睛滴入0.1 ml受试物。其中3只在滴人后2秒钟用20 ml微温水冲洗；3只在4秒后冲洗；3只不作冲洗。 于滴入后24 h、48 h和72 h、4d和7d，以肉眼或手提式裂隙灯检查眼的反应。记录结膜（发红、球结膜水肿和分泌物）、角膜（浑浊程度和范围）和虹膜（充血、肿胀、对光反应）的反应程度和持续时间 观察期限要足够评价刺激效应的可逆性或不可逆性 一般7天，看延长到21天 按规定分级标准进行评分，计算染毒后前4d最高总积分平均值和刺激反应持续时间 刺激强度分为4级，即无、轻、中、重。 部位及损伤情况 积分 A．混浊程度(以最致密部位为准) 无混浊 0 散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见 1 半透明区易分辨，虹膜轻度模糊不清 2 出现灰白色半透明区，虹膜模糊不清，瞳孔大小勉强可见 3 角膜混浊，虹膜无法辨认 4 B．角膜受损范围 ＜1/4 1 1/4～l/2 2 1/2～3/4 3 3/4～1 4 眼各部位损伤评分表 积分A×B×5 最高积为80 角膜 虹膜 结膜 化学品毒性鉴定技术规范 染毒后前4天 最高总积分平均值 刺激反应持续时间 （总积分平均值） 刺激强度 0～ 第1d≥0 无刺激性 2.5～ 第2d≥0 轻刺激性 15～ 第4d=0 轻刺激性 第4d＞0 中度刺激性 25～ 第7d≤20，半数以上动物第7d≤10 中度刺激性 第7d≤20，半数以上动物第7d＞10,但是无任何一只动物7d＞30 中度刺激性 第7d≤20，半数以上动物第7d＞10,而且有一只动物7d＞30 重度刺激性 第7d＞20 重度刺激性 眼刺激强度评价标准 化学品毒性鉴定技术规范 皮肤刺激：皮肤接触或涂抹受试物后产生的局部可逆性的炎症变化 皮肤腐蚀：皮肤接触或涂抹受试物后产生的局部不可逆性组织损伤 单次/多次；完整/破损 家兔、豚鼠 二、皮肤刺激试验 下列3种情况可不考虑做皮肤刺激试验： ①根据结构与活性关系及理化特性推测可能有腐蚀性的物质（如pH≤2或pH≥11.5）； ②受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50＜200mg/kg； ③在急性经皮毒性试验中染毒剂量达2000 mg/kg时仍未产生皮肤刺激体征的物质。 皮肤刺激试验 试验前24 h将动物背部脊柱两侧毛剪掉（不可损伤表皮），去毛范围各约3cm×3cm 取受试物0.5ml（g）直接涂在皮肤上（无损伤皮肤或损伤皮肤），对侧作为对照。然后封包、固定，敷用时间为4-24 h（应防止动物添食及经呼吸道吸收）。试验结束后，用温水或无刺激性溶剂除去残留受试物 于除去受试物后的1、24和48h观察涂抹部位皮肤反应 ，依据红斑 和水肿的情况进行皮肤刺激反应评分 一只家兔背部脊柱两侧可各准备3个去毛区进行剂量-反应研究，或测试多种受试物 物种差异：有学者用Draize试验测试了40种化学品成分，皮肤反应的敏感顺序：兔豚鼠人猪 OECD皮肤腐蚀性体外试验方法 分离的大鼠皮肤、重建的人体皮肤、人工膜模拟人体皮肤 评价指南规定：经上述体外皮肤腐蚀性试验发现受试物具有皮肤腐蚀性作用，可不再进行动物皮肤刺激/腐蚀试验，并可根据体外结果进行危害分级 即过敏性接触性皮炎，是一种对化学物免疫介导的皮肤反应，人体这类反应的特点为瘙痒、红斑、水肿、丘疹、水疱、融合水疱等。其他物种动物的反应可有所不同，可能仅见皮肤红斑和水肿 豚鼠 豚鼠最大值试验：诱导接触（ 弗氏佐剂FCA+受试物）→间隔10-14天→激发接触 局部淋巴结试验（local lymph node assay，LL