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第六章 液相色谱法 1. 色谱系统 1. 进样装置 无限直径柱应满足下列条件 2. 高输液压泵 3. 色谱柱接头和管连接 无死体积连接 (1) 柱头 (2) 柱管或管道 高效液相色谱, 流动相流量约为每秒 20μl, Dm=10 -3mm -2/s. 则若要求连接管到引起的色谱峰增宽小于5% 时,连接管直径和管长的乘积应满足: d L ≦ 0.39 mm5 数据如下 连接管道直径 允许长度 连接管道直径 允许长度 0.125 1500 0.25 100 0.15 800 0.50 6 4 梯度淋洗装置 检测器和记录仪器 两种典型的流动池 紫外吸收检测器 二极管阵列式检测器 示差折光检测器 荧光检测器 2 色谱填充柱 不同类型液相色谱柱基本指标 直径 流速 固定相 灵敏度 常规柱 4.6 1.0 C18, inertsil 1(人尿中可乐宁) 微型柱 1.0 0.04 3、5μm，30nm 毛细管柱 0.3 0.004 3、5μm，10nm 40 Nano柱 0.075 200 nl C18、PepMap 400 3、5μm，10nm 可在60秒内完成0—100%梯度变化. 流量范围:50nl—200ul 检测器体积3nl,光程:30mm 与质谱连用检测限30f.mol(飞摩尔) 2 色谱填充柱 1. 速率方程偶合式 范迪姆特方程与其偶合式偶合式的差别 H─ｕ关系的差别(虚线表示偶合式) │ Van Deemter 方程 H1├┈┈┈┈┈┈┈┈┐ H2├┈┈┈┈┈┈┈┈┥ Van Deemter方程偶合式 │ ┊ │ ┊ │ ┊ ┊ │ ┊ ┊ └────────┴─────────→ 2. 柱阻参数和柱穿透率 柱阻参数被定义为φ, 由下式计算. 3. 折合塔板高度和折合流速 Giddings提出了折合塔板高度ｈ,和折合流速ｖ的概念:定义折合塔板高度ｈ为单位颗粒直径所具有的理论板数;折合流速ｖ被定义为指溶质组分在填料颗粒外部的流速是其在颗粒内部扩散速度的倍数.表达式为: 正相色谱和反相色谱法 正相色谱: 流动相是非极性, 固定相是极性的 流动相的极性 ＜ 固定相的极性 反相色谱: 流动相是极性, 固定相是非极性的 　　　　 　流动相的极性 ＞ 固定相的极性 液固色谱分离原理与色谱固定相 1. 液固色谱原理和分离对象 Xm＋nSa == Xa＋nSm 若忽略组分与流动相溶剂分子之间的相互作用, 被吸附的分子的保留特性与吸附剂、溶质和溶剂的关系为 log K＝log Va＋β(So－ASεo) K: 是样品组分的吸附系数, 被定义为每克吸附剂吸附溶质的摩尔数与 每毫升溶剂所含的溶质的摩尔数之比; Va: 每克吸附剂吸附单分子层溶剂的体积, 单分子层的厚度约为 0.35 nm. 当吸附剂用水或其它减活剂减活时, Va减小; β:表面活性系数, 取决于吸附剂表面的化学特性和水的覆盖量, 氧化铝β=1, 硅胶:0.7β1; β=1的吸附剂为标准活性吸附剂; (So－ASεo) : 在标准活性吸附剂表面 (β=1)的自由能 AS: 溶质分子在吸附剂表面所占的面积, 数据为 0.085 nm2 ;; εo: 溶剂强度参数,等于溶剂覆盖面积为 0.085nm2 标准活性吸附剂表面的“吸附能”, 规定戊烷的εo=0, 除某些氟烃外, 其它溶剂的εo为 0～1 的正值.. 若固定相相同但用不同的流动相(溶剂)来分析同一种样品组分,可以对