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电针对阿尔茨海默病大鼠海马PKC和GDNF表达的影响 　　[摘要] 目的 探讨电针对阿尔茨海默病（alzheimer′s disease，AD）大鼠海马蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF）表达的影响。 方法 Morris水迷宫筛选40只健康Wistar大鼠随机分4组。正常组不给予任何处理，其余3组大鼠采用链脲霉素（STZ）所致AD模型，造模后模型组不治疗，电针组针刺双肾俞、双太溪、双足三里、百会、大椎等穴位治疗，西药组氢溴酸加兰他敏灌胃，疗程为4周。免疫组化法检测PKC和GDNF的表达。 结果 免疫组化显示模型组大鼠PKC和GDNF表达减少，电针组和西药组大鼠表达增加，差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 电针可能通过对AD大鼠海马PKC 和GDNF表达增强的影响，对神经元起到保护作用。 　　[关键词] 电针；阿尔茨海默病大鼠；蛋白激酶C；胶质细胞源性神经营养因子 　　[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）03（a）-0020-02 　　阿尔茨海默病是老年人常见的神经系统退行性疾病，主要病理特征为细胞外老年斑中β淀粉样蛋白的沉积、细胞内由成对的过度磷酸化的Tau 蛋白组成的神经原纤维缠结[1]，其病因及发病机制尚不清楚，多种治疗方法目前正在探索中[2]。神经营养因子（NTFs）与神经系统疾病密切关系。而胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）是神经营养因子家庭中的一名新成员。关于电针治疗AD大鼠海马GDNF表达的方面比较少，本研究主要观察电针对AD大鼠海马PKC和GDNF表达的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物选择及分组 　　清洁级健康Wistar大鼠45只，雄性，体重200～250 g，白求恩医大实验动物中心提供，合格证号2010002，经水迷宫测试筛选40只，随机分为4组：正常组、模型组、西药组和电针组，正常组常规饮水和饲料。其余3组大鼠均采用链脲霉素（STZ）所致AD模型，模型组造模后不治疗。参照华兴邦等[3]的大鼠穴位图谱，电针组针刺双肾俞（第二腰椎棘突下左、右侧旁开7 mm）、双足三里（腓骨小头下约5 mm处）、百会（顶骨正中）、大椎（第七颈椎与第一胸椎间）[4]等穴治疗，用 0.25×0.25 mm华佗牌无菌毫针针刺，连接KWD-808全能脉冲电疗仪，电压为2 V，频率为30 Hz，，强度以肢体局部轻微颤动为适。西药组采用氢溴酸加兰他敏灌胃0.5～1.0 mg/（kg?d），治疗4周。 　　1.2 主要试剂和仪器 　　氢溴酸加兰他敏，链脲霉素STZ（注射前将STZ溶于0.9%氯化钠溶液）。PKC免疫组化检测试剂盒（博士德生物工程有限公司），GDNF免疫组化检测试剂盒（博士德生物工程有限公司），脑立体定位仪，水迷宫，Hans电针仪，Olympus显微镜。 　　1.3 模型复制 　　10%水合氯醛4 mL/kg麻醉大鼠，在头部做正中矢状切口，坐标为脑表面下3.5 mm，前囟1.5 mm，矢状缝左右旁开1.5 mm。在每侧侧脑室注射10%链脲霉素10 μL，创口缝合。3 d后重复注射一次。 　　1.4 各组大鼠标本的制备 　　大鼠治疗4周后，麻醉后暴露出心脏，左心室插入灌注针头，快速灌入无菌生理盐水冲洗组织内血液，同时剪开右心耳，冲洗至肝脏变白，然后灌注4%多聚甲醛，当大鼠尾巴、四肢僵硬时断头取脑，分离海马[5]。一侧海马装入冻存管，一侧置于4%多聚甲醛中，浸泡固定，取海马标本，脱水包埋切片。 　　1.5 免疫组织化学染色大鼠海马PKC 和GDNF 　　PKC、GDNF免疫反应阳性产物为棕黄色点状颗粒，主要分布在胞浆。采集免疫组化染色图像，用Imagepro-Plus分析软件进行图像分析，每张切片区6个视野测定海马组织中阳性细胞数，所得数据经SPSS 17.0系统处理，数据结果以均数±标准差（x±s）表示。 　　2 结果 　　正常组、模型组PKC和GDNF蛋白有较高表达，模型组PKC和GDNF蛋白表达水平显著降低，治疗后西药组、电针组与模型组比较差异有统计学意义（P 0.05）。见表1。 　　3 讨论 　　PKC是一类由多种同工酶组成的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，PKC参与学习记忆与影响长时程增强（long-term potentiation，LTP）的形成有关，在神经细胞内PKC的激活参与了离子通道的调节、受体的失敏、神经递质的释放及突触传递。PKC的激活是突触可塑性及LTP形成的分子机制之一。Cordey M等[6]研究证明经典的PKC 亚型能够阻止Aβ诱导的神经细