电针对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及tau蛋白磷酸化的影响.docVIP

电针对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及tau蛋白磷酸化的影响 　　[摘要] 目的 探究电针对阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆能力改善的情况以及对大鼠海马tau蛋白磷酸化的影响。 方法 将雄性SD大鼠30只随机分成正常组、模型组和电针组，每组10只。除正常组外，其余两组侧脑室各注射β淀粉样蛋白多肽片段Aβ25-35制备动物模型。电针组治疗分为3个疗程。以Morris水迷宫来评价大鼠的学习和记忆能力，并且使用Western blot法来检测大鼠海马区Tau蛋白和其丝氨酸198位点、404位点磷酸化水平，利用软件分析测定Western blot图像条带的光密度（OD）值。 结果 模型组Morris水迷宫试验逃避潜伏期比正常组长（均P 0.05），电针组与模型组差异有统计学意义。3个组之间海马区tau蛋白总量的差异无统计学意义，与模型组比较，电针组丝氨酸的198和404位点的tau蛋白磷酸化tau蛋白水平具有降低（均P 0.05）的趋势。 结论 电针治疗显著并且能减轻AD大鼠海马tau蛋白磷酸化水平，改善AD模型大鼠学习记忆能力。 　　[关键词] 阿尔茨海默病；电针；tau蛋白；磷酸化 　　[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）05（c）-0016-03 　　老年性痴呆亦称阿尔茨海默病（Alzheimer s disease，AD），它是一种极其常见的中枢神经系统退行性疾病，由于病因及发病机制至今不清，发病以后很难治愈，给患者的日常生活也带来了很大的不便。AD患者脑内含有大量的以异常过度磷酸化的tau蛋白为主要成分的神经元纤维缠结（NFTs）[1]，有研究[2]发现AD患者的痴呆程度与神经原纤维的缠结数目具有密切的关系，而神经原纤维增粗扭曲形成缠结正意味着神经元趋于死亡，因此也可以验证出AD患者的痴呆程度与神经原纤维的缠结数目是呈正相关[3]趋势增长的说法。所以可以大胆地推断海马tau蛋白的过度磷酸化其实就是AD的核心原因。而电针治疗通过电流微弱的刺激大鼠海马区域，以此来增强其活性，通过激活磷酸酯酶活性，来限制AD患者脑tau蛋白异常过度磷酸化，从而进一步改善AD的发病症状。此实验初步探究电针刺激大鼠海马区，旨在证明电针能改善AD大鼠的记忆能力，抑制tau蛋白异常过度磷酸化，进而延缓AD的发展并改善其症状。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　健康的SD雄性大鼠60只，体重180～200 g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供（批号：2010002）。在实验室稳定条件下饲养1周。 　　1.2 主要试剂及仪器 　　戊巴比妥钠（上海索莱宝生物科技有限公司）；AB25-35（美国Chemicon公司）；tau-5单克隆抗体、tau-1单克隆抗体、p-tau（S396）多克隆抗体（Biosource公司）；脑立体定位仪（NARISHIGE SN-2型）；Morris水迷宫（北京硕林苑科技有限公司）；全能脉冲电疗仪（6805-C型）（汕头市医用设备厂有限公司）；无菌针灸针（北京健乐康医疗器械有限公司）。 　　1.3 动物造模 　　将大鼠称重并用4%戊巴比妥钠进行腹腔麻醉注射之后，将大鼠固定在大鼠脑立体定位仪上，并且可以参照《大鼠脑立体定位图谱》先对大鼠进行最常规的消毒，然后切口于颅顶正中矢状，将骨膜分离，用锥颅器快速钻开颅骨，使硬脑膜完全暴露出来。于前囟1.3 mm，矢状缝左右旁开1.6 mm，垂直3.5 mm，用微量注射器对每侧侧脑室各注射Aβ25-35（实验前将其溶于0.9%氯化钠溶液中，配置成浓度10%）。用微量注射器将Aβ25-35在3 min内缓慢注入，留针5 min，充分浸润局部组织，缓慢拔出微量注射器。第3天重复注射试剂，剂量相同，正常组不用注射药品。 　　1.4 分组和治疗 　　将雄性SD大鼠30只随机分成正常组、模型组和电针组，每组10只。电针组：第2次水迷宫测试结束后，用毫针针刺“百会”穴，平刺约2.5 mm，“大椎”穴，直刺约4 mm。“百会”穴、“大椎”穴连接6805-C型全能脉冲电疗仪，频率为30 Hz，电压为2 V，强度是以肢体轻微抖动为宜，用针刺大鼠双侧“太溪”穴，双侧“肾俞”穴，直刺进针5 mm，双侧 “足三里”穴，直刺进针4 mm，间歇5 min捻转一次，每日1次，时间40 min。7 d为1个疗程，间歇1 d，治疗3个疗程后进行行为学测试。正常组：给予正规的饲养，模型组：造模后常规饲养。 　　1.5 Morris水迷宫测试 　　迷宫水池中的平台位于东北象限正中，水面高出平台100 cm，将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中，记录其在2 min内寻找到并爬上平台的时间即逃避潜伏期。潜伏期最长时间120 s。分