白术茯苓汤高中低剂量对脾虚型克罗恩病大鼠血清TNF―α和IL―1、IL―6的影响.docVIP

白术茯苓汤高中低剂量对脾虚型克罗恩病大鼠血清TNF―α和IL―1、IL―6的影响 　　【摘要】目的：考察白术茯苓汤高中低剂量对脾虚型克罗恩病（CD）大鼠促炎因子的影响；初步探讨该方治疗脾虚CD的最佳有效剂量。方法：采用破气耗气加饥饱失常之复因脾虚造模方法结合Morris方法复制脾虚型CD大鼠动物模型，白术茯苓汤高中低剂量灌胃给药，酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）含量。结果：与空白组相比，模型组TNF-α、IL-1、 IL-6升高（P0.05）；与模型组相比，高剂量组TNF-α、IL-1降低（P0.05）；中剂量组TNF-α、IL-1、 IL-6降低（P0.05）；低剂量组TNF-α降低（P0.05）。结论：白术茯苓汤高中低剂量对脾虚型克罗恩病（CD）大鼠促炎因子的影响不同。其中白术茯苓汤中剂量组对TNF-α、IL-1、 IL-6的调节作用全面且优于高剂量组和低剂量组。 　　【关键词】白术茯苓汤；脾虚型克罗恩病；影响 　　【中图分类号】R222 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）04-0223-01 　　克罗恩病（Crohn’s disease， CD）是一种病因及发病机制尚未明确的慢性非特异性炎性肠病（IBD），病变主要影响结肠粘膜，且以溃疡为主。目前认为CD的发病是遗传和环境因素相互作用的结果，且与免疫功能异常密切相关。西医治疗主要使用水杨酸类、类固醇类和免疫抑制剂等以控制急性发作，缓解病情，减少并发症等，但疗效不稳定。迄今尚未有任何一种疗法被认为是治疗CD的特效疗法。现今，中医辨证论治以及中西医结合治疗对其有着较好疗效[1]。研究表明CD的病机特点为脾虚夹湿[2]。白术茯苓汤由白术、茯苓组成，具有健脾祛湿的功效。是治疗脾胃气虚证、脾虚湿滞证等的经典小方和常用药对[3]。本研究观察了白术茯苓汤高中低剂量对脾虚型CD大鼠血清TNF-α、IL-1、 IL-6水平的影响，探索白术茯苓汤高中低剂量调控脾虚型CD大鼠细胞因子的药效相关性，为中医方剂剂量配比理论提供一定的实验基础。 　　1材料与方法 　　1.1 动物 　　SPF级SD（Sprague Dawley）大鼠50只，由成都达硕生物科技有限公司提供，合格证号：SCXK（川）2008-11，雌雄各半，体重200±20g，检疫后备用。适应性饲养1周，自由摄食颗粒饲料，动物房温度维持在18-25℃左右。成都中医药大学基础医学院SPF级动物实验室进行，设施合格证：川实动管使第2003-015号。 　　1.2 药材与试剂 　　白术、茯苓、大黄、厚朴、枳实均购自同仁堂成都分店，经成都中医药大学制剂室鉴定为正品。 　　2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）购自Sigma公司，批号：P2297。进口分装肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）定量试剂盒（LOT：201106）、白介素-1（Interleukin-1，IL-1）定量试剂盒（LOT：201106）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）定量试剂盒（LOT：201106）由成都亚芯科技有限公司提供。 　　1.3 供试药物制备 　　1.3.1 中药汤剂的制备 　　称取药材，浸泡30min，共煎煮2次，每次30min，合并滤液，60℃恒温水浴浓缩至1g/ml，经0.45μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存备用。 　　1.3.1.1 小承气汤的配比 　　厚朴：枳实：大黄为3：3：2。 　　1.3.1.2 白术茯苓汤的高中低剂量 　　大鼠用药剂量按照国家中医药管理局的相关规定，人鼠单位体重用药量直接换算后的5、10、20倍为低、中、高剂量[4]。 　　1.3.2 TNBS灌肠液的制备 　　无水乙醇加双蒸馏水配成50%乙醇75ml，然后将5%TNBS10ml×15与50%乙醇（2：1=V：V）混合均匀，灭菌后装瓶4℃保存。 　　1.4 脾虚型CD动物模型制备 　　本实验采用破气耗气加饥饱失常之复因脾虚造模法[5]结合Morris方法[6]建立脾虚型CD动物模型。50只SD大鼠，全部雄性，按体重随机分为2批，10只常规饲养，为空白组，40只造模。空白组10只，常规饲养；40只造模大鼠采用小承气汤按20ml（kg/d），1次/d的剂量灌胃，加隔天禁食造成饥饱失常，连续14d，复制脾虚模型。并于造模第7d开始禁食不禁水24h，用2%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉，予TNBS灌肠液1ml灌肠。灌肠器插入肛门约6cm-8cm，注入灌肠液1ml。大鼠头朝下体位，且灌肠器拔出后再继续保持1min左右，以防灌肠液流出。每隔5d重复灌肠1次，共5次。 　　1.5