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石蜡包埋组织miRNA做为肿瘤标志物的研究进展 　　[摘要] miRNA是一类长度为19～25个核苷酸的非编码小分子RNA，从转录后水平调控mRNA的翻译，与肿瘤的发生、转移和预后进程密切相关。近年来研究发现，石蜡包埋组织的miRNA仍然保持一定的完整性。该文就石蜡miRNA作为肿瘤标志物的研究进展进行综述。 　　[关键词] miRNA；肿瘤；生物标志物 　　[中图分类号] R73 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2013）08（a）-0196-02 　　miRNA是一类长为19～25nt小分子单链RNA，其与靶标基因3UTR结合，通过降解mRNA或抑制其翻译，从而在转录后对靶标基因的表达水平进行调控。与肿瘤的发生、转移、耐药、预后等密切相关。目前研究miRNA的样本多来源于新鲜组织和细胞。最近发现福尔马林固定石蜡包埋的组织（Formalin-fixed and Paraffin-embedded， FFPE）中miRNA保存比较完整并与新鲜组织中的miRNA高度相关[1]，为miRNA的研究开辟了一个新的途径。石蜡组织miRNA可能是一种理想的肿瘤标志物，该文就该领域的必威体育精装版进展进行综述。 　　1 石蜡包埋组织miRNA中存在miRNA 　　长期以来，医疗和科研机构采用福尔马林固定和石蜡包埋方法保存病理组织。现在全世界已保存有大量的石蜡组织样本，覆盖所有已知的疾病。每个石蜡组织样本都具有特别的价值，关联着大量的病人数据。所以石蜡组织标本是人类对疾病研究宝贵的信息库，尤其是回顾性研究和少见疾病的研究。然而通常mRNA甚至DNA、蛋白都有不同程度的降解。但有研究表明，尽管大分子RNA可能会发生降解，但在一般情况下，小分子RNA是不受石蜡固定影响。此外，已有许多研究证实miRNA受FFPE处理的影响非常小，并且从FFPE样本中提取的microRNA与冷冻组织样本一样，可提供可信的表达谱。甚至保存长达30年的FFPE样本仍可提供可信的microRNA表达谱数据[2]。 　　2 石蜡包埋组织miRNA的提取 　　石蜡组织样本可经过异丙醇和乙醇脱蜡后通过trizol法提取总RNA，成本较低。但普通的过柱法效果较差，可能与过柱时小RNA被吸附有关。目前已有多种商品化试剂盒用于从FFPE样本中提取microRNA，例如Ambion公司的RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE，Qiagen公司的miRNeasy FFPE Kit，Norgen公司的FFPE RNA Purification Kit等。试剂盒提取简单快速，并且易于富集miRNA，但成本较高。 　　3 石蜡组织miRNA的检测 　　对于发现新的miRNA分子通过小分子RNA建库克隆测序是经典方法。首先构建cDNA文库，再将这些cDNA进行克隆、测序，然后生物信息学分析，最后将具有发夹结构的小分子RNA进行Northern杂交以验证。 　　石蜡组织样本中的已知miRNA检测可以采用miRNA芯片技术，能够发现石蜡组织样本中的miRNA表达谱的差异，利用被筛选出的具有差异的miRNA作进一步研究。目前已有多种类型的miRNA检测芯片可以选用。 但是基因芯片检测方法的重现性和准确性相对较差， 一般多用于初筛， 对获得的结果通常需要进一步验证。RT-PCR技术是目前最常用的验证miRNA的技术，常见的有Taqman探针法、SYBR Green法、茎环RT-PCR法。也有人采用表面增强拉曼光谱法、磁珠流式检测等。 　　4 石蜡组织miRNA与新鲜组织miRNA的相关性 　　目前已经有多项研究表明，石蜡组织中的miRNA与新鲜组织的miRNA有良好的相关性，Xiao Zhang[3]将7对匹配的石蜡包埋组织和新鲜冰冻组织进行miRNA检测，spearman相关指数为0.847～0.948。Jinghuan Li[4]做了类似的研究发现两者的相关系数R20.95，并且认为在总RNA量相当时石蜡中microRNA含量比新鲜组织多。有人比较石蜡和冰冻组织micorRNA及mRNA表达的相关性，发现microRNA高度相关，mRNA则较差。 　　5 石蜡包埋组织miRNA在肿瘤检测中的应用 　　由于石蜡组织中miRNA与新鲜组织中的miRNA有良好的相关性，部分学者利用石蜡组织进行了研究。Danit Lebanony[5] 利用microRNA做为标志物区分鳞癌和其他非小细胞肺癌，其中hsa-miR-205可区分鳞癌和其他非小细胞肺癌的敏感度96%特异性90%。Nitzan Rosenfeld[6]则通过实验发现石蜡中miRNA不仅保存完好，并且通过miRNA可以区分组织来源。