老年人口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓关系的临床研究.docVIP

老年人口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓关系的临床研究 　　[摘要] 目的 探讨老年患者口腔CK与OLP的相关性，为临床的疾病诊断和制定治疗方案提供依据。 方法 32例病例样本来源于我院口腔科经病理学检验确诊的OLP患者颊部病变组织，为研究组；另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜组织30例，为对照组；进行样本制备和垂直电泳处理，观察两组样本的CK阳性情况。 结果 研究组患者CK2、CK4和CK5阳性率明显低于对照组，而研究组CK10、CK13和CK14的阳性表达率明显高于对照组（P0.05）。 结论 口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓的发病有一定相关性，CK2、CK4、CK5的浅表达和CK10、CK13、CK14的过表达，影响上皮细胞组织的增殖、分裂、角化等，进而影响OLP的发病。 　　[关键词] 老年患者；口腔细胞角蛋白；口腔扁平苔藓；相关性 　　[中图分类号] R781.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）25-0149-02 　　老年人体质差，易发生各类口腔感染。口腔扁平苔藓（OLP）是一种较为常见的口腔内慢性非感染性病变，主要发病于口腔黏膜，表现为上皮的过度角化，可累及口腔颊、牙齿、舌等其他部位的黏膜组织，属于免疫反应性疾病的一类[1]。目前临床对OLP的治疗比较困难，易反复且有恶性倾向，被世界卫生组织（WHO）列入到癌前状态范畴中。研究表明，细胞角蛋白（CK）与上皮角质细胞的增殖具有相关性[2]。CK属于角质细胞中的骨架性蛋白，多于上皮细胞中表达，具有组织分化的特异性和高度保守性[3]。为探讨老年患者口腔CK与OLP的相关性，给临床的疾病诊断和制定治疗方案提供依据，早期遏制癌变，笔者选取我院自2011年6～12月间收集的OLP标本共32例，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 临床资料 　　32例病例样本来源于我院口腔科经病理学检验确诊的OLP患者颊部病变组织，为研究组，其中男18例，女14例；年龄60～82岁，平均（69.4±5.3）岁；排除服用激素类药物患者和有口腔黏膜病变者。另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜组织30例为对照组，其中男15例，女15例，年龄60～78岁，平均（66.2±4.8）岁。 　　1.2 方法 　　1.2.1 仪器与试剂 采用北京天诚活德生物技术有限公司提供的DYY-12C型号电泳仪，由同厂提供的DYCZ-30型夹芯式垂直电泳槽。紫外可见分光光度计由上海精密仪器仪表有限公司供应，型号UV-3200PCGLP。聚偏二氟乙烯（PVDF）膜由美国BIO-RAD伯乐公司生产。鼠抗人广谱细胞角蛋白（P-CK）单克隆抗体由上海丽臣生物科技有限公司供应，配有ELISA试剂盒。辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG由上海万安生物科技有限公司提供。DAB染色试剂盒由北京赛驰生物科技有限公司提供。 　　1.2.2 样本制备 取两组口腔黏膜标本各分为2份，一份行病理学HE染色验证确诊，一份行样本制备与检测。将口腔黏膜标本置入浓度3 mmol/L的乙二胺四乙酸（EDTA）无钙镁磷盐缓冲液中，置于37℃环境下静置2 h后取出，利用显微外科组织镊在10×4倍的观察视野下分离上皮组织。分离后的上皮组织置入碾钵中，加入液氮研磨至粉末状，再加入高盐缓冲液1 mL，于4℃环境下匀浆1 h后，移入离心管进行离心处理10 min，转速5 000 r/min，弃除上清液后，将沉淀物重悬于低盐缓冲液中，继续混匀搅拌，于4℃环境下移入离心管离心处理5 min，转速5000 r/min，再次弃除上清液，将沉淀物以PBS洗涤5 min，第3次离心，转速5 000 r/min，弃除上清液，沉淀物加入细胞角蛋白溶解液1 mL后于沸水浴中搅拌7 min，冷却后再行离心，离心后上清液用紫外分光光度计测定蛋白定量，蛋白浓度为2.5 μg/μL。 　　1.2.3 电泳 进行聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，凝胶上的样孔均匀分为两份，各放入5个样本，两份样本一一对应。两份凝胶一份使用考马斯亮蓝R250进行染色处理后观察色带变化情况，另一份应用Western杂交电泳处理，证实获得蛋白条带属于角蛋白。各样品槽内加样，浓缩胶5%，分离胶12%。电泳后将凝胶切取一半移至PVDF膜上，再使用封闭液封闭好，于4℃环境下静置过夜，次日加入抗CK抗体，静置于4℃环境下过度，再以PBST液洗涤PVDF膜，反复3次后，加入辣根过氧化物酶，二抗标记，置于37℃环境下行2 h振荡，取出后用PBST洗涤PVDF膜，反复3次，参照DAB染色试剂盒的相关说明进行显色处理。 　　1.3 统计学方法 　　获得数据录入统计学软件包SPSS15.0中并建立数据库进行数据分析，计数资料采用χ2检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果