二乙酰一肟法选编.ppt

尿素的测定 ——二乙酰一肟法 临床检验 卫生检验 步骤 1、吸取水样10 mL(尿素含量在0.001-0. 015 mg范围内)于25 mL棕色具塞试管中，另取棕色具塞试管加人尿素标准使用液：0,0.1,0.3,0.5,0.7,0.9,1.1,1.3,1.5 mL，并用纯水稀释至25 mL。 2、于上述各管加人1. 0 ml二乙酰一肟溶液，混匀。再加安替比林溶液2. 0 mL，混匀。 3、将上述试管在沸水浴中加热50 min，取出并在流动的自来水中冷却2 min。立即以纯水为对照，在460 nm处，用1 cm比色皿，测定各管吸光值(加热45~55 min，呈最深色，若再延长时间吸光值下降)。 4、以浓度对照吸光值，制备标准曲线。以水样吸光值从曲线上查出尿素含量。 二乙酰一肟法的研究进展 参考文献 * 尿素是一项重要的检测指标，在很多领域都需要对样品中尿素含量的测定来对其进行了解。现重点研究两个方面： ※ 临床检验 ※ 卫生检验 尿素的测定是临床上用于诊断和观察各种肾脏疾病的一项重要指标。使用较多的方法是：二乙酰一肟法。 原理：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合成色素原二嗪化合物，由于二乙酰不稳定，故通常在反应系统中先由二乙酰一肟与强酸作用，产生二乙酰，再与尿素反应，缩合成 红色 的二嗪化合物（Fearon反应）[1]。 二乙酰一肟 二乙酰 羟胺 二乙酰 反应方程式： 尿素 二嗪化合物（红色） （4,5-二甲基-2咪唑酮） 步骤 0.02 -　 -　 　 蒸馏水（ml） - 0.02 - 尿素标准应用液 - - 0.02 血清（ml） 5 5 5 酸性试剂（ml） 0.5 0.5 0.5 　 二乙酰一肟溶液 空白管 标准管 测定管 　 加入物 表1 二乙酰一肟显色法操作步骤[1] 混匀后，置沸水浴中加热12min，取出，置冷水中冷却5min后，用分光光度计540nm，以空白管调至零点，读取标准管及测定管吸光度。 在卫生检验方面，可用于如掺伪食品中的尿素检验，也可用于肥料中的尿素检验等。现重点研究在游泳池水中的尿素检验。 游泳池水中的尿素检验属于公共场所卫生检验，有国家规定的标准检验方法：二乙酰一肟安替比林法（GB/T 18204.29-2000）。 原理：尿素与二乙酸一肟及安替比林反应呈现 黄色 ，在波长460nm处有最大吸收峰。 需用棕色的具塞比色管 无特殊 试剂瓶要求 　 较长，45-55分钟 　 较短，10-15分钟 　 加热时间 需要，并按稀释倍数求出原样品中尿素的浓度 不需要 稀释样品 460nm 540nm 吸光度比色波长 黄色 红色 显色颜色 二乙酰一肟安替比林法 二乙酰一肟法 方法名称 　 卫生检验 　 临床检验 　 项目 二乙酰一肟法在临床检验上和卫生检验上测定尿素的区别 二乙酰反应又叫丁二酮反应，由Fearon于1939年首先报道，因此又称为Fearon反应。该反应初始为尿素与二乙酰反应，但由于二乙酰溶液不稳定，所以多使用二乙酰一肟作为反应基础试剂。 其研究进展如下： 在临床检验方面： 二乙酰一肟法在多数基层医院仍采用，但其有许多不利缺点，易对实验结果造成误差，可对其进行改良。 1、采用低浓度二乙酰一肟显色剂和内置搁垫的恒温水浴显色，并校正回收率，从而使精确度明显提高[2]； 2、56℃保温测定法[3]； 3、改进试剂配方，使其在室温下能长时间稳定，防止其变黄、变浊[4]； 4、添加一定浓度硫胺脲和金属离子等可以提高反应溶液和试剂稳定性、增加反应灵敏度，如加入硫氨脲及Fe3+，既可以提高和稳定产物颜色，也能将产生的羟胺除去。 1、增加沸水浴时间，由50min缩短为20min[5]； 2、由于反应所使用的具塞比色管较难买到，可使用普通透明比色管并在外面套上黑色塑料袋来代替棕色比色管[6]； 3、扩大标准曲线，将定容体积由25ml改为10ml，并加入稳定剂异丙醇，从而使线性范围变宽，吸光度的值增大[7]。 在卫生检验方面：