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穿山龙总皂苷提取方法研究 　　【摘要】目的探讨穿山龙中总皂苷的提取方法，为后续的提取工艺研究奠定基础。方法以总皂苷含量和浸膏得率为指标，考察超声提取法、回流提取法、索氏提取法，确定最佳提取方法。结果超声提取法总皂苷含量8.67%，浸膏得率为3.66%；回流提取法总皂苷含量13.16%，浸膏得率为7.46%；索氏提取法总皂苷含量11.22%，浸膏得率为6.10%。结论最佳提取方法为回流提取法。 　　【关键词】穿山龙；总皂苷；薯蓣皂苷元；提取方法 　　穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣（Dioscorea nipponica Makino）的干燥根茎，味甘苦温，具有祛风湿，止痛，舒筋活血，止咳平喘祛痰功效[1]。主治风湿性关节炎，筋骨麻木，大骨节病，跌扑损伤，慢性支气管炎、咳嗽气喘。现代药理研究证明，其总皂苷类成分具有调节免疫、改善心血管功能、祛痰、抗肿瘤、抗炎镇痛等多种药理作用[2]。穿山龙主要成分是甾体皂苷类，包括薯蓣皂苷（Dioscin）、纤细皂苷（Gracillin）和水溶性皂苷等[3]。本品是近30年来从民间搜集而逐步广泛应用的，民间多用其浸酒或煎服，为治疗风湿病的三大常用药之一[4]。有报道用穿山龙注射液治疗风湿和类风湿关节炎，有效率达89%[4]。可见该药的用途是极其广泛的，开发利用穿山龙的前景广阔，因此其提取及含量测定的工艺方法至关重要。 　　本实验拟以总皂苷含量和浸膏得率为指标，考察超声提取法、回流提取法、索氏提取法，确定最佳提取方法。为后续的单因素及正交相结合的方法确定穿山龙总皂苷最佳工艺研究奠定基础。 　　1材料与仪器 　　穿山龙药材购于广州清平药材市场，经广东药学院中药鉴定教研室李书渊教授鉴定均为薯蓣科薯蓣属穿龙薯蓣（Dioscoreanipponica Makino）的干燥根茎。 　　UC-1800型紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；TC-15型恒温电热套（海宁市华星仪器厂）；DFY-400型摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；岛津AY120托盘电子分析天平；HH-6恒温水浴锅（江苏省金坛市宏华仪器厂）；上海亚荣生化仪器厂旋转蒸发仪。 　　高氯酸、95%乙醇、氯仿、无水乙醇、浓硫酸等化学试剂均为分析纯。薯蓣皂苷对照品购于中国药品生物制品检定所，蒸馏水为自制。 　　2方法与结果 　　2.1穿山龙总皂苷含量测定[5-8]采用紫外分光光度法测定总皂苷含量。 　　2.1.1对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品4.25mg，无水乙醇定容至25mL，配制成0.170mg/mL对照品溶液。 　　2.1.2供试品溶液的制备精密称取药材粉末1.5g（过4号筛），置于提取器中，精密加入一定浓度乙醇一定的量，提取一定时间，滤过。滤液置蒸发皿中，挥去溶剂，加一定量的浓度硫酸，超声处理2min，再加三氯甲烷20mL，加热回流一定的时间，放冷，置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷液，用NaOH溶液和适量蒸馏水洗至中性，减压回收溶剂至干，残渣加无水乙醇使溶解，转移至20mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 　　2.1.3测定波长的选择取标准溶液于石英皿中，在200-600nm波长范围内，用紫外可见分光光度计扫描，可知其在410nm处有最大吸收峰，选410nm作为测定的波长。 　　2.1.4标准曲线的绘制精密吸取3.1.1项中的对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5mL溶液，挥干溶剂，加入5mL高氯酸，置25℃水浴保温25min，以高氯酸为空白，在410nm处测定吸光度。根据吸光度与薯蓣皂苷元质量（mg）绘制标准曲线，得到吸光度y与薯蓣皂苷元质量x（mg）的线性方程y=0.7044x+0.0545，相关系数的平方为0.9991。薯蓣皂苷元含量在0.0875-0.6125mg内，与吸光度呈良好线性关系，见图1。 　　2.1.5穿山龙总皂苷含量测定精密吸取0.1mL供试品溶液于10ml比色管中，挥干溶剂，加高氯酸5mL，置25℃水浴中保温25min，取出冷却至室温，以高氯酸为空白对照，测定吸光度A，计算供试品中总皂苷含量。 　　2.2提取方法的考察 　　2.2.1回流提取法精密称取药材粉末1.5g（过4号筛），置具塞圆底烧瓶中，加热回流提取，按2.1.2项下方法制备，固定实验条件：乙醇浓度60%，乙醇用量100mL，提取时间1h，酸的浓度为2mol/L，酸的用量20mL，水解时间1h，制备成供试品溶液，测定其吸光度，计算总皂苷含量。 　　2.2.2索氏提取法精密称取药材粉末1.5g（过4号筛），置索氏提取器中提取，按2.1.2项下方法制备，固定实验条件：乙醇浓度60%，乙醇用量100mL，提